Diferencia entre benzonasa y dnase

Diferencia clave: benzonasa vs dNase
 

La degradación de los ácidos nucleicos es importante para muchas técnicas de biología molecular. Se usa ampliamente en tecnología de ADN recombinante para deshacerse de los fragmentos no deseados de ADN y ARN. Las enzimas degradantes del ácido nucleico se denominan nucleasas, y pueden ser de diferentes tipos basados ​​en la función requerida. Las nucleasas que degradan el ADN se conocen como DNasas, mientras que las que degradan el ARN son ARN conocidas. Estas enzimas se usan principalmente en in vitro experimentos donde en vitro Las pruebas moleculares se llevan a cabo para aislar el ADN puro, el ARN o las proteínas. Las benzonasas son un tipo de nucleasas que degradan tanto el ADN como el ARN, mientras que las DNasas degradan solo el ADN. Esta es la diferencia clave entre benzonasa y dnase.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la benzonasa?
3. Que es dnase
4. Similitudes entre benzonasa y dNasa
5. Comparación de lado a lado - Benzonasa vs DNasa en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la benzonasa??

La benzonasa es una endonucleasa genéticamente diseñada de Serratia marcescens. Esta enzima se produce en mi. coli anfitriones a escala industrial. La benzonasa es capaz de escindir ADN de doble cadena, ADN lineal, ADN circular y ARN monocatenario. Así, la benzonasa es comercialmente importante.  La enzima benconasa es un dímero de proteína que tiene 245 aminoácidos idénticos, ~ 30 kDa subunidades con dos enlaces disulfuro esenciales. La benzonasa escinde ácidos nucleicos en su extremo de 5 'y da como resultado fragmentos con 5'ends libres. La benzonasa puede escindir ácidos nucleicos en cualquier secuencia, pero prefiere regiones ricas en GC.

La benzonasa se almacena en -20 ⁰C. Se encuentra que el pH óptimo para la actividad enzimática es 8.0 - 9.2. Las aplicaciones de la benzonasa incluyen la preparación de la muestra para la electroforesis en gel de proteína 2D donde la benzonasa elimina los ácidos nucleicos unidos y la eliminación de contaminantes de ácido nucleico de preparaciones de proteínas recombinantes. También se usa para reducir la viscosidad de los extractos de proteínas y evitar el agrupamiento de las células en una mezcla celular.

Que es dnase?

La dNasa es una enzima nucleasa, hidrolítica que solo es capaz de escindir ADN de doble cadena. Hay dos tipos principales de DNasas: DNasa I y DNase II. La DNasa I participa en la escisión de ADN doble cadena para producir polinucleótidos con extremos libres de 5 '. La DNasa II está involucrada en la escisión de ADN doble cadena para producir hilos de polinucleótidos con extremos libres de 3 'o voladizos.

Dnase I

DNase I funciona a un pH óptimo entre 7.0 - 8.0. La actividad enzimática depende de muchos cofactores iónicos que incluyen, ca²⁺, Mg²⁺ o MN²⁺. La actividad de MG²⁺ y MN²⁺ decide la función de la dnasa i. En presencia de mg²⁺, DNasa I escinde cada hebra de dsDNA de forma independiente. Esto tiene lugar de manera aleatoria. En contraste, en presencia de MN^2+, La enzima escinde ambas hebras de ADN en aproximadamente el mismo sitio. Esta escisión dará como resultado la producción de dos tipos de fragmentos de ADN; Un tipo con extremos contundentes y otro tipo con uno o dos voladizos de nucleótidos.

Figura 02: DNase

DNase II

DNase II funciona a un pH óptimo de 4.5-5.0 y se requieren iones metálicos divalentes para su actividad, similar a la DNasa I. Se sabe que el mecanismo de la DNasa II consiste en tres pasos principales.

1. Se inducen múltiples roturas de una sola cadena dentro de la columna vertebral de ADN.
2. Se producen nucleótidos ácidos solubles y oligonucleótidos.
3. El cambio hipercrómico no lineal ocurre en la última fase.

Los principales inhibidores de la enzima DNasa incluyen queladores de metal, metales de transición y productos químicos como el dodecil sulfato de sodio y el β - mercaptoetanol.

Las principales aplicaciones de DNasa incluyen la preparación de extractos de ARN sin ADN y extractos de proteínas, y la eliminación del ADN de la plantilla durante los experimentos de transcripción in vitro.

¿Cuáles son las similitudes entre benzonasa y dnase??

• Ambas son enzimas hidrolíticas.
• Ambas son nucleasas.
• Ambos participan escindiendo los enlaces de fosfodiéster de los ácidos nucleicos.
• Ambos requieren un pH óptimo y temperaturas de almacenamiento para mantener la actividad de la enzima.
• Los inhibidores de las enzimas incluyen agentes quelantes, metales de transición y productos químicos de detergente.
• Las aplicaciones se centran principalmente en obtener extractos de alta pureza de ADN, ARN y proteínas.
• Ambas enzimas se pueden producir a través de la ingeniería genética.

¿Cuál es la diferencia entre benzonasa y dnase??

Resumen -Benzonasa vs DNase

Las enzimas de nucleasa se usan ampliamente en diferentes procedimientos experimentales con respecto a la biología molecular e ingeniería genética. Benzonasa y dNasa son dos tipos de nucleasas. La benzonasa está involucrada en la degradación de ADN y ARN, mientras que la DNasa está involucrada en la escisión de ADN de doble cadena. Esta es la diferencia básica entre benzonasa y dnase. En la actualidad, ambos tipos de nucleasa se producen a través de la tecnología de ADN recombinante que produce una enzimas de mayor calidad que están optimizadas para la máxima producción.

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Referencias:

1.“Desoxirribonucleasa I de Bovine Pancreas D5025."Sigma-Aldrich, disponible aquí. Consultado el 19 de septiembre. 2017.
2. "Deoxyribonuclease II."Deoxyribonuclease II - Manual de enzimas de Worthington, disponible aquí. Consultado el 19 de septiembre. 2017.

Imagen de cortesía:

1."Sitio hipersensible DNasa" por Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. - Wang Y-M, Zhou P, Wang L-Y, Li Z-H, Zhang Y-N, et al. (2012) Correlación entre la distribución hipersensible de DNasa I y la expresión génica en células HeLa S3. PLoS One 7 (8): E42414. doi: 10.1371/diario.pan de maíz.0042414 (CC BY-SA 2.5) Vía Commons Wikimedia