Diferencia entre cromatofocusado y enfoque isoeléctrico

El diferencia clave Entre el enfoque cromatofocusado y isoeléctrico es que El cromatOfocusing es un tipo de método de cromatografía de columna que utiliza resinas de intercambio iónico, mientras que el enfoque isoeléctrico es un tipo de técnica de electroforesis que utiliza geles de gradiente de pH inmovilizados.

El enfoque cromatoso y isoeléctrico son dos técnicas que separan las proteínas de acuerdo con sus puntos isoeléctricos. Tanto el enfoque cromatofocusado como el enfoque isoeléctrico tienen una gran potencia de resolución. El cromatOfocusing es un método de cromatografía de columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de separación electroforética. Además, el cromatOfocusing no utiliza un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico necesita un campo eléctrico.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es el cromatofocuso? 
3. ¿Qué es el enfoque isoeléctrico?
4. Similitudes entre el enfoque cromatoso y el enfoque isoeléctrico
5. Comparación de lado a lado: cromatofocusado versus enfoque isoeléctrico en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es el cromatofocuso??

El cromatOfocusing es un tipo de cromatografía de alta elución que separa las proteínas de acuerdo con las diferencias en su punto isoeléctrico. Utiliza una columna de resina de intercambio iónico y un gradiente de pH desarrollado internamente. A diferencia del enfoque isoeléctrico, el cromatOfocusing no involucra un campo eléctrico. El cromatOfocusing es una poderosa técnica de purificación que puede resolver moléculas altamente similares, incluso solo difieren en 0.02 unidades de pH. Por lo tanto, el cromatOfocusing es el más adecuado como un paso de pulido final cuando se requiere una alta resolución para separar componentes muy similares.

En ChromatOfocusing, la muestra se aplica a la columna mezclándola con el búfer de inicio. Las proteínas que están a un pH por encima de su punto isoeléctrico se cargan negativamente y permanecen cerca de la parte superior de la columna, mientras que otras proteínas que están a pH por debajo de su punto isoeléctrico, migran por la columna. La proteína con el punto isoeléctrico más alto se eluye primero, mientras que la proteína con el punto isoeléctrico más bajo se eluye al último de la columna. Esta técnica se ve afectada por varios factores, como la precipitación de proteínas y la linealidad del gradiente de pH,.

¿Qué es el enfoque isoeléctrico??

El enfoque isoeléctrico es una técnica que separa diferentes moléculas basadas en su punto isoeléctrico. También se conoce como electrofocusamiento. Esta técnica se usa a menudo para la separación de proteínas en un gel. En el enfoque isoeléctrico, la muestra se agrega en geles de gradiente de pH inmovilizado (IPG). IPG Gel es una matriz de gel de acrilamida copolimerizada con un gradiente de pH. Las proteínas migran hacia el cátodo hasta que encuentran la región de pH de sus puntos isoeléctricos. Cuando una proteína alcanza el pH que no tiene carga neta, la migración cesa y ofrece una banda estacionaria. Del mismo modo, cada proteína da una banda en un punto en el gradiente de pH correspondiente a su punto isoeléctrico.

Figura 01: enfoque isoeléctrico

El enfoque isoeléctrico es el primer paso de la electroforesis en gel bidimensional. En esa técnica, las proteínas se separan primero de acuerdo con sus puntos isoeléctricos por enfoque isoeléctrico y luego se separan por su peso molecular a través de SDS-PAGE.

¿Cuáles son las similitudes entre el enfoque cromatoso y el enfoque isoeléctrico??

• El enfoque de cromatofus y el enfoque isoeléctrico son dos métodos de alta resolución.
• Ambos se basan en el punto isoeléctrico de las proteínas.
• Estas técnicas utilizan un gradiente de pH.
• Ambos procedimientos son informativos para la caracterización de las variantes de hemoglobina humana.
• Pueden resolver moléculas donde los valores de PI difieren en tan solo 0.02 unidades de pH.

¿Cuál es la diferencia entre el enfoque cromatoso y el enfoque isoeléctrico??

La cromatofocusación es una técnica de cromatografía de columna de alta resolución que separa las proteínas de acuerdo con su punto isoeléctrico. En contraste, el enfoque isoeléctrico es una técnica electroforética que separa las proteínas de acuerdo con su punto isoeléctrico mediante la aplicación de un campo eléctrico a lo largo de un gradiente de pH formado en un capilar. Entonces, esta es la diferencia clave entre el enfoque cromato y el enfoque isoeléctrico.

Otra diferencia entre el enfoque cromatoso y el enfoque isoeléctrico es que el cromatOfocusing no involucra un campo eléctrico, mientras que el enfoque isoeléctrico necesita un campo eléctrico.

Resumen: cromatococusar frente a enfoque isoeléctrico

El enfoque cromatoso y el enfoque isoeléctrico son dos técnicas similares que tienen una alta capacidad de resolución de las moléculas, especialmente moléculas muy similares. El cromatOfocusing es una técnica de cromatografía de columna de alta resolución, mientras que el enfoque isoeléctrico es un método de electroforesis. El cromatOfocusing no implica un campo eléctrico, a diferencia del enfoque isoeléctrico. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre el enfoque cromatofocusado y el enfoque isoeléctrico.

Referencia:

1. "ChromatOfocusing: principios y métodos."Sigma, disponible aquí.
2. "Enfoque isoeléctrico". Interno.Wikipedia.Org, 2020, disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. "Isoelectric Focusing contribuye2" por MRBean427 - Trabajo propio (CC BY -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia