Diferencia entre clonación y subcloning

Diferencia clave: clonación vs subcloning
 

La clonación y la subclonación son procedimientos biológicos moleculares que crean células u organismos genéticamente idénticos que llevan el ADN o el gen que son de interés. La clonación es una técnica que implica la inserción del gen o ADN interesado en un vector, la replicación de la misma dentro de una bacteria huésped y la producción de células u organismos que son copias exactas de la composición genética. La subcloning es una técnica que implica la inserción del gen de interés, que ya está insertado en un vector, en un vector secundario, la replicación de él dentro de una bacteria del huésped y la producción de copias genéticamente idénticas de células u organismos. La diferencia clave entre la clonación y la subcloning es que, En la clonación, el gen de interés, una vez ligado en un vector, continúa el proceso de clonación mientras, en la subclonación, el gen de interés ya clonado se separa del vector principal e se inserta nuevamente en un vector receptor y continúa el proceso.

CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. Que es la clonación
3. Que esta subcloning
4. Comparación de lado a lado: clonación vs subcloning
5. Resumen

Que es la clonación?

La clonación es el procedimiento que produce organismos o células genéticamente idénticos. En la naturaleza, la clonación ocurre en los medios de reproducción asexual. Cuando no hay recombinación genética o alteración, las células hija reciben la misma composición genética de los padres. Los organismos procariotas y eucariotas crean clones por fisión binaria, brote, mitosis, etc.  En biología molecular, los genes de clonación o fragmentos específicos de ADN es un método popular para estudiar la estructura y la función de esa sección de ADN particular.

El objetivo principal de la clonación molecular es hacer millones de copias de células u organismos genéticamente idénticos que llevan el fragmento de interés de ADN (principalmente genes). Crea organismos con copias genéticas exactas de otro. Principalmente, los genes específicos se clonan en estudios moleculares para obtener información estructural y funcional y para la secuenciación de ADN. Además, para la producción de proteínas o productos específicos a gran escala, la clonación se usa ampliamente.

Procedimiento de clonación

Los pasos básicos del procedimiento de clonación son los siguientes.

1. Identificación y aislamiento del gen de interés. (Amplificación del gen de interés por PCR).
2. Digestión de restricción del gen de interés (endonucleasa de restricción corta el gen).
3. Digestión de restricción del ADN del vector. (El ADN vectorial también se corta utilizando la misma endonucleasa de restricción).
4. Inserción del gen en el vector y la formación de la molécula recombinante.
5. Transformación del vector recombinante en una bacteria huésped.
6. Aislamiento e identificación de las bacterias transformadas (el vector plásmido debe contener un gen seleccionable, más comúnmente un gen de resistencia a los antibióticos para detectar bacterias transformadas).
7. Expresión génica recombinante dentro del huésped.

Figura_01: Procedimiento de clonación

Que esta subcloning?

La subcloning es un procedimiento para mover un gen de interés de un vector a otro para ver la expresión del gen para obtener la funcionalidad deseada del gen. En este método, están involucrados dos vectores; a saber, vector principal y vector de destino. Los insertos clonados se mueven nuevamente a un segundo vector en subcloning. El objetivo de transferir el gen del primer vector al segundo vector es obtener algo que no podría ser hecho por el primer vector o separar un gen nuevamente dentro del fragmento ya clonado de ADN y expresarlo solo. Las enzimas de restricción se utilizan en este procedimiento al principio.

Procedimiento de subclonación

Los pasos básicos de subcloning son los siguientes.

1. Con la ayuda de la restricción endonucleasas, la separación del ADN de interés en el plásmido donante (vector principal).
2. Amplificación del ADN de interés utilizando PCR.
3. Purificación del producto de PCR (ADN de interés) por electroforesis en gel.
4. Apertura del plásmido receptor por las mismas endonucleasas de restricción utilizadas para separar el ADN de interés en el plásmido principal.
5. Ligadura del ADN de interés (gen) al plásmido receptor para crear el plásmido subclonado.
6. Transformación del vector subclonado en una bacteria huésped competente.
7. Detección de células transformadas.
8. Purificación del ADN plasmídico y el uso para la secuenciación del ADN o la expresión de los genes para obtener los productos deseados.

La subcloning se lleva a cabo en ocasiones de aislar un gen del grupo clonado de genes o cuando se requiere que el gen de interés se transfiera a un plásmido útil para ver la función exacta del gen de interés.

Figura_02: Procedimiento de subclonación

¿Cuál es la diferencia entre clonación y subclonación??

Resumen - Cloning vs subcloning

La clonación crea células u organismos genéticamente idénticos con el gen insertado o ADN de interés. Procede a través de la separación e inserción del ADN de interés en un vector y expresión dentro de una bacteria del huésped. Subcloning comparte pasos similares con la clonación. Sin embargo, en subcloning, el fragmento de ADN ya clonado (gen de interés) se inserta en un vector y se transforma en una bacteria huésped. Esa es la diferencia clave entre la clonación y la subclonación.

Referencias

1. Lodish, Harvey. “Clonación de ADN con vectores plásmidos."Biología de células moleculares. 4ª edición. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, 01 de enero. 1970. Web. 05 mar. 2017
2. "Subcloning."Wikipedia. Fundación Wikimedia, 14 de febrero. 2017. Web. 06 mar. 2017
3. "Subcloning."Subcloning | Artículos de acceso abierto | Revistas de acceso abierto | Actas de la conferencia | Editores | Autores | Revisores | eventos científicos. norte.pag., norte.d. Web. 06 mar. 2017
4. Wackerhage, Henning. "Cómo subclonar."Cómo subclonar. norte.pag., 01 de enero. 1970. Web. 06 mar. 2017

Imagen de cortesía

1. Procedimiento de clonación molecular - por CNX OpenStax [CC por 4.0], a través de Wikimedia Commons
2. Procedimiento de subclonación: por el cargador original fue el takómetro en English Wikipedia (transferido desde EN.Wikipedia a los comunes.) [CC por 2.5], a través de Wikimedia Commons