La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es un método de amplificación de ADN que se utiliza en aplicaciones biológicas moleculares. Es una técnica de uso común que hace de millones a miles de millones de copias de una secuencia de ADN particularmente interesada. Es un in vitro método realizado en laboratorios. La técnica de PCR depende totalmente de la ADN polimerasa producida comercialmente llamada Taq polimerasa. Y también requiere varios otros componentes y un mantenimiento de temperatura adecuado. Un componente importante son los cebadores. Los cebadores son las secuencias de ADN cortas diseñadas específicamente para la secuencia de ADN objetivo. Por lo general, tienen alrededor de 20 nucleótidos de longitud. La polimerasa Taq cataliza la adición de nucleótidos en la secuencia de nucleótidos preexistentes. Por lo tanto, los cebadores se sirven como puntos de partida de la síntesis de nuevos hilos. Taq polimerasa funciona solo en dirección 5 'a 3', por lo tanto, la síntesis de ADN ocurre en la misma dirección de 5 'a 3'. Dado que el ADN es doble varado, se necesitan dos tipos de cebadores en PCR. Se conocen como imprimación hacia adelante y imprimación inversa. Los cebadores hacia adelante e inversa se denominan en función de la dirección del alargamiento del cebador en el ADN cuando se produce la síntesis de ADN. REMPLEZADOS DE CARRADOR FARTA con el hilo de ADN antisentido e inicia la síntesis de la cadena +ve del gen en dirección 5 'a 3'. Recubrimientos de cebador inverso con la cadena sensorial e inicia la síntesis de la cadena complementaria de la cadena de codificación; que es -Ve el hilo del gen en dirección 5'to 3 '. Este es el diferencia clave Entre los cebadores hacia adelante e inverso.
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es una imprimación hacia adelante?
3. ¿Qué es una imprimación inversa?
4. Similitudes entre la imprimación hacia adelante e inversa
5. Comparación de lado a lado - Forward vs Inverso inverso en forma tabular
6. Resumen
La orientación hacia adelante es la síntesis de la cadena de codificación o el hilo sensorial de un gen. La polimerasa Taq cataliza la síntesis de una nueva línea en dirección 5 'a 3'. La síntesis de la cadena de codificación ocurre cuando el cebador se recubre con la no codificación o la hebra antisentido y se alarga en la dirección 5 'a 3'.
Figura 01: Primeros de avance y reverso
El cebador que se recoce con el hilo antisentido o el hilo no codificante o el hilo de la plantilla se conoce como cebador directo ya que el cebador avanzado actúa como un punto de partida a la síntesis de codificación o la hebra positiva del gen. Forward Primer tiene una secuencia de nucleótidos cortos que es complementaria al extremo flanqueante de 3 'del hilo antisentido. Se hibrida con el hilo antisentido y facilita la polimerasa Taq para agregar nucleótidos que son complementarios a la fila de plantilla.
El imprimador inverso es la secuencia de ADN corta que se recoce con el extremo de 3 'de la cadena sensorial o el hilo de codificación. El cebador inverso sirve como punto de partida para sintetizar un hilo complementario de la secuencia de codificación o la secuencia no codificante. El imprimación inversa está diseñada complementaria al extremo de 3 'del hilo de codificación. Por lo tanto, se recocen con el extremo de 3 'de la cadena de codificación y permite que Taq polimerasa sintetice el hilo antisentido o el hilo de la plantilla. Dado que su orientación está de manera invertida, este cebador se etiqueta como imprimación inversa.
Los cebadores reversos y delanteros son importantes para la producción de millones a miles de millones de copias de regiones particulares de ADN que están dirigidos o interesados.
Primer directo vs imprimación inversa | |
Forward Primer es la secuencia de ADN corta que se hibrida con el extremo 3 'de la cadena de no codificación o la plantilla del gen y sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia de codificación. | El cebador inverso es la secuencia de ADN corta que se hibrida con el extremo 3 'de la codificación o la cadena no de la tonta y sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia no codificante. |
Hilo de recocido | |
Recocidos de imprimación hacia adelante con Strand de plantilla. | Recoces de imprimación inversa con el hilo no. |
Nueva secuencia resultante | |
El imprimador hacia adelante facilita la síntesis de la secuencia de codificación. | El cebador inverso facilita la síntesis de la secuencia no codificante. |
Hay dos tipos de cebadores involucrados en la técnica de PCR. Son cebadores avanzados e inversos. Basado en el alargamiento del cebador en la nueva síntesis de la cadena de ADN, estos cebadores están etiquetados o nombrados. La polimerasa Taq sintetiza el nuevo ADN en la orientación de 5 'a 3'. Por lo tanto, los cebadores están diseñados como complementarios a los extremos de 3 'de los hilos dobles. El imprimador delantero que se alarga en la dirección 5 'a 3' hibrida con el extremo 3 'del antisentido o la plantilla o la secuencia no codificante. Sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia de codificación. El cebador inverso que se alarga en la dirección 5 'a 3' hibrida con el extremo 3 'de la codificación o la notemplato o la cadena sensorial. Sirve como punto de partida para sintetizar la secuencia no codificante. Esta es la diferencia entre la imprimación hacia adelante e inversa.
1."Primer (biología molecular)."Wikipedia, Fundación Wikimedia, 20 de febrero. 2018. Disponible aquí
2."Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)." Academia Khan. Disponible aquí
1.'Primeros revcomps fundido2'by Richard Wheeler (Zephyris) - Trabajo propio, (CC By -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia