Diferencia entre Klenow y T4 ADN polimerasa

El diferencia clave entre Klenow y T4 ADN polimerasa es que El fragmento de Klenow es un gran fragmento de mi. coli La ADN polimerasa 1, mientras que la ADN polimerasa de T4 es la ADN polimerasa 1 del bacteriófago T4.

Las ADN polimerasas son enzimas que catalizan la formación de ADN agregando desoxirribonucleótidos al extremo 3'-OH de un cebador preexistente. Hay diferentes tipos de ADN polimerasas. La mayoría de las ADN polimerasas utilizadas en la biología molecular son las ADN polimerasas procariotas. El fragmento de Klenow y la ADN polimerasa T4 son dos tipos de ADN polimerasas que tienen un origen procariota. El fragmento de Klenow es el gran fragmento que se genera a partir de la escisión de mi.coli ADN polimerasa 1 en dos fragmentos por subtilisina de proteasa bacteriana. La ADN polimerasa T4 es la ADN polimerasa 1 del bacteriófago T4. Tanto Klenow como T4 ADN polimerasa tienen actividad de exonucleasa 5 '→ 3' y 3 '→ 5'. Ambos carecen de actividad de exonucleasa 5 '→ 3', lo que los hace más adecuados para muchas aplicaciones en biología molecular.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es Klenow? 
3. ¿Qué es T4 ADN polimerasa?
4. Similitudes entre Klenow y T4 ADN polimerasa
5. Comparación lado a lado: Klenow vs T4 ADN polimerasa en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es Klenow??

El fragmento de Klenow es una ADN polimerasa que es útil en la biología molecular. Cuando mi. coli La ADN polimerasa 1 sufre digestión proteolítica por proteasa bacteriana, subtilisina, resulta en dos fragmentos: uno es un fragmento grande y el otro es un pequeño fragmento. El fragmento de Klenow es el gran fragmento que tiene 68 kDa de tamaño. El fragmento Klenow tiene actividades de exonucleasa (corrección) de 5 '→ 3' y 3 '→ 5'. La actividad de exonucleasa de 3 '→ 5' del fragmento de Klenow facilita la eliminación de bases agregadas incorrectamente a medida que avanza la polimerización. El fragmento de Klenow no contiene actividad de exonucleasa 5 '→ 3', que se muestra por longitud completa o intacta mi. coli ADN polimerasa 1. Es ventajoso cuando solo se necesita la actividad de polimerización. Los fragmentos de Klenow se utilizan para llenar los voladizos de 5 ', la síntesis de sondas, la secuenciación del ADN, la síntesis de ADN de doble cadena, la síntesis de la segunda cadena de ADNc y la mutagénesis dirigida al sitio.

Figura 01: fragmento de Klenow

En ciertas aplicaciones, la actividad de exonucleasa de 3 '→ 5' del fragmento de Klenow también se vuelve indeseable. Se puede eliminar introduciendo una mutación en el gen que codifica el fragmento de Klenow. El fragmento de Klenow resultante se conoce como fragmento exo-klenow. Por lo tanto, el fragmento de exo-klenow tiene solo la actividad de la polimerasa 5 '→ 3' de mi. coli polimerasa 1.

¿Qué es T4 ADN polimerasa??

La ADN polimerasa T4 es una ADN polimerasa que cataliza la síntesis de ADN. Es una proteína codificada por Bacteriófago T4. Estructuralmente, la ADN polimerasa de T4 es una proteína de residuos de 898 aminoácidos (peso molecular de 103.6 KDA). Requiere una plantilla y un imprimador para catalizar la síntesis.

Figura 02: ADN polimerasa T4

Similar al fragmento de Klenow, la ADN polimerasa T4 tiene actividades de exonucleasa 5 '→ 3' y 3 '→ 5'. Además, carece de actividad de exonucleasa 5 '→ 3'. La ADN polimerasa T4 es útil en el relleno de los extremos que se produzcan 5'. También se usa a menudo para el marcado de 5'd o 3'end de ADN de doble cadena. La ADN polimerasa T4 se usa con frecuencia en la clonación roma. La actividad de exonucleasa de 3 '→ 5' (corrección de pruebas) de la ADN polimerasa T4 es más fuerte (más de 200 veces) que el fragmento de Klenow. Lo más importante, la ADN polimerasa de T4 tiene una alta procesividad (400 nucleótidos por segundo).

¿Cuáles son las similitudes entre Klenow y T4 ADN polimerasa??

• La ADN polimerasa de Klenow y T4 son dos polimerasas procariotas.
• Ambas polimerasas tienen actividad de exonucleasa 5 '→ 3' y 3 '→ 5'.
• No exhiben actividad de exonucleasa 5 '→ 3'.
• Ambas enzimas requieren una plantilla y un cebador para catalizar la síntesis de ADN.
• Estas enzimas se pueden inactivar el calor en 75 ⁰

¿Cuál es la diferencia entre Klenow y T4 ADN polimerasa??

La diferencia clave entre Klenow y T4 ADN polimerasa es el origen de cada enzima. El fragmento de Klenow se origina en una bacteria, mientras que la ADN polimerasa de T4 se origina en un bacteriófago que es un virus. La ADN polimerasa T4 tiene una alta procesividad que el fragmento de Klenow. Además, la ADN polimerasa de T4 tiene una fuerte actividad de corrección de pruebas que el fragmento de Klenow. Por lo tanto, esta es otra diferencia entre Klenow y T4 ADN polimerasa.

La siguiente información gráfica enumera más diferencias entre Klenow y T4 ADN polimerasa en forma tabular.

Resumen -Klenow vs T4 ADN polimerasa

El fragmento de Klenow es un gran fragmento de E. coli ADN polimerasa 1. Tiene solo 5 '→ 3' Polimerasa y actividades de exonucleasa 3 '→ 5'. Carece de actividad de exonucleasa de 5 '→ 3' de la E intacta. coli ADN Pol 1. Por lo tanto, el fragmento de Klenow es una polimerasa bacteriana. Por otro lado, la ADN polimerasa de T4 es una polimerasa codificada por el bacteriófago T4. Similar al fragmento Klenow, contiene actividades de exonucleasa 5 '→ 3' y 3 '→ 5', y carece de actividad de exonucleasa 5 '→ 3'. Sin embargo, la ADN polimerasa de T4 tiene una alta procesatividad y alta actividad de revisión que el fragmento de Klenow. Entonces, esta es la diferencia clave entre Klenow y T4 ADN polimerasa.

Referencia:

1. "ADN polimerasa, T4."ADN polimerasa, T4 - Manual de enzimas de Worthington, disponible aquí.
2. Rittié, Laure y Bernard Perbal. "Enzimas utilizadas en biología molecular: una guía útil."Journal of Cell Communication and Signaling, Springer Países Bajos, junio de 2008, disponible aquí.

Imagen de cortesía:

1. "PolymeraseSeMains" - Banco de datos de proteínas (dominio público) a través de Commons Wikimedia 

2. "T4-DNA-polimerasa" por ChemPro-J. Wang, P. Yu, t. C. Lin, W. H. Konigsberg, t. A. Steitz (1996). "Estructuras cristalinas de un fragmento NH2-terminal de la ADN polimerasa T4 y sus complejos con ADN monocatenario y con iones metálicos divalentes" Bioquímica 35: 8110-8119. Doi: 10.1021/bi960178r. (CC0) a través de Commons Wikimedia