Diferencia entre la traducción de Nick y el relleno final
El diferencia clave Entre la traducción de Nick y el relleno final es que La traducción de Nick es un proceso que crea sondas de ADN etiquetadas para varias reacciones de hibridación, mientras que el relleno final es una técnica que crea fragmentos contundentes al agregar nucleótidos a los voladizos monocatenarios.
La traducción de Nick y el llenado final son dos técnicas utilizadas en biología molecular. La traducción de Nick se usa para etiquetar sondas para la hibridación para detectar secuencias de nucleótidos específicas. El relleno final se usa para hacer fragmentos roma que tuviera extremos pegajosos con voladizos monocatenarios. Ambas técnicas tienen una gran importancia, y se realizan rutinariamente en los laboratorios de investigación molecular.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la traducción de Nick?
3. ¿Qué es el relleno final?
4. Similitudes entre la traducción de Nick y el relleno final
5. Comparación de lado a lado - Nick Translation vs Fin en forma tabular
6. Resumen
¿Qué es la traducción de Nick??
La traducción de Nick es una técnica importante utilizada para preparar sondas marcadas para varias técnicas biológicas moleculares, como la transferencia de, en el lugar hibridación, fluorescente en el lugar hibridación, etc. Es un in vitro Método de etiquetado de ADN. Las sondas de ADN se utilizan para identificar secuencias específicas de ADN o ARN. Con la ayuda de una sonda marcada, se pueden marcar o visualizar fragmentos específicos a partir de una mezcla compleja de ácido nucleico. Por lo tanto, las sondas etiquetadas se preparan utilizando varias técnicas. La traducción de Nick es uno de esos métodos que produce sondas etiquetadas con la ayuda de las enzimas DNasa 1 y ADN polimerasa 1.
Figura 01: Traducción de Nick
El proceso de traducción de Nick comienza con la actividad enzimática DNasa 1. La DNasa 1 introduce Nicks en la columna vertebral de fosfato del ADN doble cadena mediante la escisión de los enlaces de fosfodiéster entre los nucleótidos. Una vez que se crea el nick, se producirá un grupo gratuito de 3 'OH del nucleótido, y la enzima de ADN polimerasa 1 actuará en consecuencia. La actividad de exonucleasa de 5 'a 3' de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos de la nick hacia la dirección 3 'de la cadena de ADN.
Simultáneamente, la actividad de la polimerasa de la enzima ADN polimerasa 1 funciona y agrega nucleótidos para reemplazar los nucleótidos eliminados. Si los nucleótidos están marcados, el reemplazo ocurrirá por los nucleótidos marcados y marcará el ADN para la identificación. Finalmente, este ADN marcado recientemente sintetizado se puede usar como sondas en varias reacciones de hibridación.
¿Qué es el relleno final??
El relleno final es una técnica utilizada en biología molecular para hacer fragmentos roma. La digestión de restricción produce fragmentos con voladizos. Estos fragmentos pueden no ser compatibles para ligar en vectores de plásmidos. Los vectores a menudo se rompen para permitir que se unan los extremos no compatibles. Por lo tanto, los fragmentos con voladizos se pueden impulsar agregando los nucleótidos a la cadena complementaria usando el voladizo como plantilla para la polimerización. Este proceso se conoce como relleno final.
Las ADN polimerasas como el fragmento de Klenow de la ADN polimerasa I y la T4 la ADN polimerasa catalizan el relleno de extremo. Agregan nucleótidos para completar (5 '→ 3') y mastican (3 '→ 5'). Una vez que se llenan los extremos pegajosos, se vuelven frunces y están listos para ligar en un vector.
Además, el relleno final se puede usar para etiquetar las moléculas de ADN. Sin embargo, solo se puede usar para etiquetar las moléculas de ADN con extremos pegajosos. En comparación con la traducción de Nick, el relleno final es un método más suave que rara vez causa roturas de ADN.
¿Cuáles son las similitudes entre la traducción de Nick y el relleno final??
- Tanto la traducción de nick como el relleno final son técnicas biológicas moleculares.
- Se pueden usar para etiquetar sondas.
- Ambos son in vitro
¿Cuál es la diferencia entre la traducción de Nick y el relleno final??
La traducción de Nick es una técnica que crea sondas etiquetadas para la hibridación. Por el contrario, el relleno final es una técnica que crea fragmentos contundentes para la ligadura a los vectores. Entonces, esta es la diferencia clave entre la traducción de nick y el relleno final. Además, la traducción de Nick requiere el uso de la actividad de exonucleasa 5'TO 3 ', mientras que el llenado final no requiere actividad de exonucleasa 5'TO 3'.
La infografía a continuación tabula las diferencias entre la traducción de Nick y el relleno final en más detalles.
Resumen -Nick Translation vs End Rilling
La traducción de Nick es un método que incorpora nucleótidos radiolabelados en el ADN. Sintetiza sondas etiquetadas basadas en las actividades de la dNasa 1 y mi. coli Enzimas de ADN polimerasa 1. El relleno final, por otro lado, es una técnica que produce fragmentos contundentes. Cuando los fragmentos tienen extremos pegajosos (voladizos monocatenarios), es necesario hacerlos extremos rectos para ligar en vectores. El relleno final agrega nucleótidos compatibles y crea fragmentos de extremo roma para hacerlos compatibles para la ligadura. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre la traducción de nick y el relleno final.
Referencia:
"Bugunting: Neb."New England Biolabs: Reactivos para la industria de las ciencias de la vida, disponibles aquí.
"Traducción de Nick - una descripción general". Con ciencias.Com, 2020, disponible aquí.
Imagen de cortesía:
1. "Fish (hibridación fluorescente in situ)" por Mrmatze - Trabajo propio (CC By -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia
