Diferencia entre la traducción de Nick y la extensión del cebador

Diferencia de clave: la traducción de Nick vs Extensión de Primer
 

La traducción de Nick y la extensión del cebador son dos técnicas importantes realizadas en biología molecular. La diferencia clave entre la traducción de nick y la extensión del cebador es que El proceso de traducción de Nick produce sondas etiquetadas para otras técnicas de hibridación mientras El método de extensión del cebador identifica una secuencia de ARN específica de una mezcla y revela información sobre la expresión de ARNm. Ambas técnicas tienen una gran importancia y se realizan rutinariamente en los laboratorios de investigación molecular.

CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la traducción de Nick?
3. ¿Qué es la extensión del imprimador?
4. Comparación de lado a lado - Traducción de Nick vs Extensión Primer
5. Resumen

¿Qué es la traducción de Nick??

La traducción de Nick es una técnica importante utilizada para preparar sondas marcadas para varias técnicas biológicas moleculares, como la transferencia de, en el lugar hibridación, fluorescente en el lugar hibridación, etc. Es un in vitro Método de etiquetado de ADN. Las sondas de ADN se utilizan para identificar secuencias específicas de ADN o ARN. Con la ayuda de una sonda marcada, se pueden marcar o visualizar fragmentos específicos a partir de una mezcla compleja de ácido nucleico. Por lo tanto, las sondas etiquetadas se preparan utilizando varias técnicas para ser utilizadas para diferentes técnicas. La traducción de Nick es uno de esos métodos que produce sondas etiquetadas con la ayuda de las enzimas DNasa 1 y ADN polimerasa 1.

El proceso de traducción de Nick comienza con la actividad enzimática DNasa 1. La DNasa 1 introduce nicks en la columna vertebral de fosfato del ADN doble cadena mediante la escisión de los enlaces de fosfodiéster entre los nucleótidos. Una vez que el Nick se cree gratis, el grupo de 3 'OH del nucleótido se producirá y la enzima de ADN polimerasa 1 actuará sobre ella. La actividad de exonucleasa de 5 'a 3' de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos de la nick hacia la dirección 3 'de la cadena de ADN. Simultáneamente, la actividad de la polimerasa de la enzima ADN polimerasa 1 funciona y agrega nucleótidos para reemplazar los nucleótidos eliminados. Si los nucleótidos se etiquetaron, el reemplazo ocurrirá por los nucleótidos marcados y marcará el ADN para la identificación. Este ADN marcado recientemente sintetizado se puede usar como sondas en varias reacciones de hibridación en biología molecular.

Figura 01: Proceso de traducción de Nick

¿Qué es la extensión del imprimador??

La extensión del cebador es una técnica que se utiliza para encontrar una secuencia de ARN específica a partir de una mezcla de ARN y localizar el extremo 5 'de la transcripción de ARNm. También se usa para estudiar la estructura del ARN y la expresión. El método de extensión del cebador se lleva a cabo con cebadores marcados o con nucleótidos marcados. Si se utilizan cebadores marcados, excluye la necesidad de etiquetar los nucleótidos que se usan para la síntesis de ADNc. Hay varios pasos en esta técnica. Comienza con la extracción de ARN de la muestra. Luego se agrega un imprimador de oligonucleótido marcado a la mezcla junto con los ingredientes necesarios para sintetizar ADNc de una secuencia de ARN específica. Recoces de imprimación con la secuencia complementaria de la mezcla. Usando la secuencia recopilada por cebador como plantilla, la enzima transcriptasa inversa sintetiza el ADN complementario (ADNc) de la secuencia de ARN. El recocido de cebador y la transcripción inversa se producen solo cuando la secuencia de ARN específica está presente en la muestra. Finalmente, cuando se realiza la electroforesis en gel desnaturalizante, se puede determinar el tamaño de la secuencia de ARN. También es fácil encontrar la base +1 de la secuencia de ARNm (sitio de iniciación de transcripción) por el método de extensión del cebador. La cantidad de ARNm presente en la muestra se puede cuantificar por este método si se usa un exceso de cebador.

Figura 02: Extensión del cebador

¿Cuál es la diferencia entre la traducción de Nick y la extensión del imprimación??

Resumen -Traducción de Nick vs Extensión Primer

La traducción de Nick es un método utilizado para sintetizar sondas etiquetadas basadas en las actividades de DNase 1 y E. coli Enzimas de ADN polimerasa 1. Es un in vitro Método empleado en los laboratorios antes de las diferentes técnicas de hibridación. Durante la traducción de Nick, la actividad de exonucleasa 5'-3 'de la ADN polimerasa 1 elimina los nucleótidos por delante de la actividad de Nick y la polimerasa de la ADN polimerasa 1 reemplaza los nucleótidos eliminados con nucleótidos marcados detrás del nick. La extensión del cebador es un método que se utiliza para detectar una transcripción específica de ARN de una mezcla y cuantificar el tamaño y la cantidad de ARN de interés. Esta es la diferencia entre la traducción de Nick y la extensión del imprimación.

Referencias
1. Reid, Alex. "Traducción de Nick."Springer. norte.pag., norte.d. Web. 18 abril. 2017
2. "Extensión de imprimación."Diagnóstico nacional. norte.pag., norte.d. Web. 19 abril. 2017
3. Kuo, m. T., y W. Pilón. “Traaduración de nick de cromosomas metafase: marcado in vitro de regiones hypersables de nucleasa en cromosomas.Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, febrero. 1985. Web. 19 abril. 2017
4. Raymond et al. “Ensayo de PCR de extensión de cebador simple y cuantitativo para el monitoreo directo de microARN y ARN de interferencia corta."ARN. Copyright 2005 por RNA Society, nov. 2005. Web. 19 abril. 2017

Imagen de cortesía:
1. "Ensayo de extensión Primer" de JJNMMNJJ - Trabajo propio (CC BY -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia