La transferencia es una técnica importante para la detección de secuencias específicas de ADN, ARN y proteínas de sus mezclas en biología molecular. Se realiza usando una membrana llamada blot. Hay diferentes técnicas de transferencia como la transferencia de norte, sur y occidental. La selección de una membrana adecuada para el proceso de transferencia debe realizarse cuidadosamente para evitar la unión inespecífica y las detecciones incorrectas. La nitrocelulosa, el nylon y el PVDF se usan comúnmente en técnicas de transferencia. Tienen diferentes características. La diferencia clave entre la nitrocelulosa y la membrana de nylon es que Las membranas de nitrocelulosa tienen un alto potencial de inmovilización de proteínas mientras Las membranas de nylon tienen un alto potencial de inmovilización de ácido nucleico. Sin embargo, ambos tipos de membranas se usan con frecuencia en técnicas de transferencia.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es una membrana de nitrocelulosa?
3. ¿Qué es una membrana de nylon?
4. Comparación de lado a lado -nitrocelulosa vs membrana de nylon
5. Resumen
La membrana de nitrocelulosa es un filtro de membrana de uso común en el ácido nucleico y las técnicas de transferencia de proteínas. Tiene un alto potencial de unión a proteínas. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se usan ampliamente en la técnica de transferencia Western. Las membranas de nitrocelulosa son compatibles con todas las técnicas de hibridación y muestran capacidades de unión superiores sin interferencias. Las membranas de nitrocelulosa son de naturaleza naturalmente hidrofílica. Hacen interacción hidrofílica con moléculas y las inmovilizan eficientemente en la membrana. Las membranas comerciales de nitrocelulosa están disponibles en dos tamaños de poros: 0.45 y 0.2 µm.
Figura 01: Membrana de nitrocelulosa utilizada en la transferencia Western
La membrana de nylon es otro tipo de membrana comercial utilizada en técnicas de transferencia. Se usa alternativamente con membranas de nitrocelulosa para transferencia Southern y Northern. Las membranas de nylon son ideales para la transferencia Southern que la nitrocelulosa debido a su alta afinidad a la unión con el ADN. Debido a varias características únicas de las membranas de nylon, los investigadores comúnmente usan membranas de nylon para transferencia Southern y Northern en lugar de sobre la membrana de nitrocelulosa. También se recomiendan las membranas de nylon para eliminar y reprobar, a diferencia de la nitrocelulosa.
Figura 02: Membrana de nylon utilizada para la transferencia Southern
Nitrocelulosa vs membrana de nylon | |
Las membranas de nitrocelulosa son frágiles. | Las membranas de nylon son menos frágiles. |
Manejo | |
Son difíciles de manejar. | Son fáciles de manejar. |
Reprobación | |
Las membranas de nitrocelulosa no compatibles son difíciles de reprobar. | La reprobación es fácil con las membranas de nylon. |
Compatibilidad con varias condiciones de almacenamiento | |
Las membranas de nitrocelulosa tienen menos resistencia para resistir varias condiciones de almacenamiento. | Las membranas de nylon responden de manera más robusta a varias condiciones de almacenamiento. |
Usar | |
Se requiere previa. | No se requiere la prewetting para las membranas de nylon. |
Naturaleza hidrofílica | |
Las membranas de nitrocelulosa son de naturaleza hidrofílica pero son menos hidrófilas que las membranas de nylon. | Son de naturaleza altamente hidrofílica. |
Potencial de inmovilización | |
Las membranas de nitrocelulosa tienen menos afinidad por los ácidos nucleicos. Pero tiene una alta afinidad por las proteínas. | Las membranas de nylon tienen un alto potencial de unión con ácidos nucleicos que las membranas de nitrocelulosa. |
Las membranas de nitrocelulosa y nylon son hojas especiales utilizadas en la técnica de transferencia para reproducir el patrón de bandas en el gel. Permiten la posibilidad de detectar una secuencia específica o una proteína de las mezclas inmovilizándolas en la membrana. Una vez que las moléculas inmovilizadas en la membrana, se pueden usar como sustrato para el análisis de hibridación con sondas marcadas. La membrana de nitrocelulosa se usa comúnmente para la detección de proteínas en la técnica de transferencia Western debido a su alta afinidad de unión con las proteínas. Las membranas de nylon a menudo se usan para la transferencia Southern y Northern. Esta es la diferencia entre nitrocelulosa y membrana de nylon.
Referencias:
1. Hayes, P. C., C. Riñonal. Wolf y J. D. Hayes. "Técnicas de transferencia para el estudio de ADN, ARN y proteínas."BMJ: British Medical Journal. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, 14 de octubre. 1989. Web. 07 de abril. 2017
2. Mahmood, Tahrin y Ping-Chang Yang. "Western Blot: técnica, teoría y problemas de problemas."North American Journal of Medical Sciences. Mednow Publications & Media Pvt Ltd, septiembre. 2012. Web. 07 de abril. 2017
Imagen de cortesía:
1. "Western Blot Transfer" de Bensaccount en English Wikipedia (CC por 3.0) a través de Commons Wikimedia