Diferencia entre nitrocelulosa y PVDF
Diferencia clave: nitrocelulosa vs PVDF
La transferencia Western es un método que permite la detección y cuantificación de proteínas específicas de una muestra de proteínas. La fiabilidad de la técnica depende de la selección de una membrana correcta para la absorción de proteínas del gel. Hay diferentes tipos de membranas microporosas. Las membranas de nitrocelulosa y PVDF son dos de esas membranas preferidas por los investigadores debido a sus atributos especiales sobre los otros tipos de membranas. La selección entre la nitrocelulosa o PVDF también es otro desafío en la transferencia Western. Tanto la nitrocelulosa como el PVDF tienen una alta capacidad de absorción de proteínas. La diferencia clave entre la membrana de nitrocelulosa y PVDF es que Las membranas de nitrocelulosa no tienen la capacidad de eliminar los anticuerpos y reutilizar la membrana para la reprobación de anticuerpos, mientras que las membranas de PVDF tienen capacidad de desnudez y reutilización.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la nitrocelulosa?
3. ¿Qué es PVDF?
4. Comparación de lado a lado: nitrocelulosa vs PVDF
5. Resumen
¿Qué es la nitrocelulosa??
La nitrocelulosa es un polímero fabricado mediante el tratamiento de la celulosa con ácido nítrico y se usa para hacer membranas microporosas en biología molecular, especialmente para técnicas de transferencia como la transferencia Southern, Northern y Western. Los tamaños de poros de las membranas de nitrocelulosa varían de 3 a 20 µm. Las membranas microporosas de nitrocelulosa facilitan la detección de reacción inmunoquímica que ocurre en la superficie de la membrana. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se usan con frecuencia para la inmovilización de proteínas y la detección de proteínas específicas en la transferencia Western. Las membranas de nitrocelulosa también pueden inmovilizar glucoproteínas y ácidos nucleicos.
Se prefieren las membranas de nitrocelulosa en los ensayos de flujo lateral debido a varias características. Las membranas de nitrocelulosa absorben proteínas a una alta concentración. El disolvente utilizado para humedecer la membrana no disminuye la absorción de la proteína de la membrana de nitrocelulosa. Las membranas de nitrocelulosa se pueden cortar fácilmente al tamaño del gel deseado y transferir proteínas del gel a la membrana mediante transferencia eléctrica o capilar. La nitrocelulosa permite un flujo más rápido de proteínas a través de la membrana con un alto potencial de unión. La nitrocelulosa muestra una fuerza mejorada de manejo. Otro atributo especial de la membrana de nitrocelulosa es que puede pegarse fácilmente con adhesivos resistentes al agua no solventes en varios respaldos de plástico.
Figura 01: Membrana de nitrocelulosa para transferencia Western
¿Qué es PVDF??
El difluoruro de polivinilideno (PVDF) es fluoropolímero producido por la polimerización del difluoruro de vinilideno y tiene una alta capacidad de inmovilización de proteínas. Por lo tanto, las membranas microporosas hechas de PVDF se utilizan en técnicas de transferencia Western para analizar proteínas específicas de las mezclas de proteínas. Las membranas de PVDF también se pueden usar para el análisis de aminoácidos y la secuenciación de proteínas. La característica más importante de la membrana de PVDF sobre la membrana de nitrocelulosa es que se puede eliminar fácilmente de los anticuerpos y reutilizar para sondas de anticuerpos posteriores.
Las membranas PVDF son más gruesas que las membranas de nitrocelulosa; Por lo tanto, más resistente a los daños durante la reutilización. Las membranas de PVDF son altamente hidrófobas. Por lo tanto, deben empaparse en metanol o isopropanol antes de usar.
¿Cuál es la diferencia entre nitrocelulosa y PVDF??
Nitrocelulosa vs PVDF | |
| La nitrocelulosa es un polímero compuesto por celulosa. | PVDF es un fluoropolímero producido por la polimerización del difluoruro de vinilideno. |
| Tamaño de poro de membrana | |
| Los tamaños típicos de los poros son 0.1, 0.2 o 0.45 μ | Los tamaños típicos de los poros son 0.1, 0.2 o 0.45 μm |
| Capacidad de unión a proteínas | |
| La nitrocelulosa tiene una capacidad de unión de proteína de 80 a 100 μg/cm2. | PVDF tiene una capacidad de unión a proteínas de 170 a 200 μg/cm2. |
| Sensibilidad | |
| Esto tiene una baja sensibilidad en comparación con PVDF. | Esto tiene una alta sensibilidad. |
| Detección de proteínas expresadas a humilde | |
| Dado que la sensibilidad es baja en las membranas de nitrocelulosa, no es adecuada para la detección de proteínas expresadas a humilde. | Esto es más adecuado para la detección de proteínas a humildes debido a su alta sensibilidad. |
| Ruido de fondo | |
| Esto tiene un ruido de fondo más bajo | Esto tiene un mayor ruido de fondo. |
| Interacciones con proteínas | |
| Las moléculas de proteínas se unen a las membranas de nitrocelulosa a través de interacciones hidrofóbicas. | Las proteínas se unen a las membranas de PVDF a través de interacciones hidrofóbicas y dipolares. |
| Naturaleza de la membrana | |
| La nitrocelulosa es frágil y frágil. Sin embargo, las versiones de nitrocelulosa están disponibles y son resistentes. | PVDF es más duradero y tiene una mayor resistencia química. |
| Capacidad para desnudarse y reutilizar | |
| La nitrocelulosa puede tener dificultades para desnudar y reprobar sin perder la señal. | PVDF es ideal para reprobar y secuenciar aplicaciones. |
| Idoneidad | |
| La nitrocelulosa es ideal para detectar proteínas de bajo peso molecular. | PVDF es más adecuado para detectar proteínas de mayor peso molecular. |
| Otros usos | |
| La nitrocelulosa se puede usar para el análisis de ácido nucleico y la transferencia de puntos/ranuras. | PVDF se puede usar para la secuenciación de proteínas y los sistemas de ensayo de fase sólida. |
| Costo | |
| Esto es más barato que las membranas de PVDF. | Esto es más caro que las membranas de nitrocelulosa. |
| Necesidad de pre-mojado | |
| Las membranas de nitrocelulosa no requieren predacción con metanol | Las membranas de PVDF requieren predacción con metanol. |
Resumen -Nitrocelulosa vs PVDF
Las membranas de nitrocelulosa fueron las primeras membranas utilizadas comercialmente para el ensayo de flujo lateral. Tienen una alta capacidad para absorber proteínas. Por lo tanto, las membranas de nitrocelulosa se usan en la transferencia Western. PVDF es otro tipo de membrana utilizada en la transferencia Western y también tiene una alta capacidad de absorción de proteínas. Ambos tipos se utilizan en la transferencia Western para el análisis de proteínas. Sin embargo, las membranas de PVDF tienen atributos más especiales, lo que los hace más adecuados que las membranas de nitrocelulosa para la transferencia Western. Pero, las membranas de nitrocelulosa son más adecuadas para detectar proteínas con bajo peso molecular, las membranas de PVDF son más adecuadas para detectar proteínas ponderadas moleculares altas. Esta es la diferencia entre las membranas de nitrocelulosa y PVDF.
Imagen de cortesía:
1."Western Blot Transfer" de Bensaccount en English Wikipedia (CC por 3.0) a través de Commons Wikimedia
Referencia:
1.Luque-García, José L., Ge Zhou, Tung-Tien Sun y Thomas A. Neubert. "Uso de membranas de nitrocelulosa para la caracterización de proteínas por espectrometría de masas de desorción/ionización con láser asistida por matriz." Química analítica. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, 15 de julio de 2006. Web. 28 Mar. 2017
2."Marcadores moleculares y biotecnología vegetal." Libros de Google. norte.pag., norte.d. Web. 28 Mar. 2017
3.Lunes 8 de abril de 2013 Tweet. "The Magic's in the Membrane: Elija sabiamente para los mejores resultados de Western Blot."Biocompare. norte.pag., 08 abril. 2013. Web. 28 Mar. 2017
