Diferencia entre el norte del sur y la transferencia Western
Diferencia clave - Northern vs Southern vs Western Blotting
La detección de secuencias específicas de ADN, ARN y proteínas es esencial para varios tipos de estudios en biología molecular. La electroforesis en gel es una técnica que separa el ADN, el ARN y las proteínas de acuerdo con sus tamaños. A partir de los perfiles de gel, la secuencia de ADN particular, la secuencia de ARN o la proteína se detectan mediante las técnicas especiales llamadas transferencia e hibridación con sondas marcadas. Hay tres métodos de transferencia de tipos diferentes, a saber, Southern, Northern y Western. La diferencia clave entre el norte del sur y la transferencia Western se encuentra con el tipo de molécula que detecta de una muestra. Southern Blotting es un método que detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN. Northern Blotting es una técnica que detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN. Western Blotting es un método que detecta una proteína específica de una muestra de proteína.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la transferencia Southern?
3. ¿Qué es la transferencia Northern?
4. ¿Qué es la transferencia Western?
5. Comparación de lado a lado - Northern vs Southern vs Western Blotting
6. Resumen
¿Qué es la transferencia Southern??
La técnica de transferencia Southern fue desarrollada por E. METRO. Sur en 1975 para la identificación de una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN. Esta es la primera técnica de transferencia introducida en biología molecular. Habilitó la detección de genes específicos del ADN, fragmentos específicos del ADN, etc. Hay varios pasos involucrados en la técnica de transferencia Southern. Son los siguientes.
- El ADN se aísla de la muestra y se digiere con endonucleasas de restricción.
- La muestra digerida está separada por electroforesis en gel de agarosa.
- Los fragmentos de ADN en el gel se desnaturalizan en hilos únicos mediante el uso de una solución alcalina.
- El ADN de una sola cadena se transfiere a una membrana del filtro de nitrocelulosa mediante transferencia capilar.
- El ADN transferido se fija en la membrana de forma permanente.
- El ADN fijo en la membrana se hibridan con sondas marcadas.
- El ADN no unido se elimina de la membrana lavando.
- La película de rayos X está expuesta a la membrana y se prepara un autorradiógrafo.
La transferencia Southern se aplica a diferentes aspectos de la biología molecular. Es útil en el mapeo RFLP, estudios forenses, metilación del ADN en la expresión génica, detección de genes mutados en trastornos genéticos, huellas dactilares de ADN, etc.
Figura 01: Técnica de transferencia Southern
¿Qué es la transferencia Northern??
Northern Blotting es un método diseñado para detectar una secuencia de ARN específica o secuencia de ARNm de una muestra para estudiar la expresión génica. Esta técnica fue desarrollada por Alwine, Kemp y Stark en 1979. Difiere de las técnicas de transferencia Sourthern y Western debido a varios pasos. Sin embargo, esta técnica también se realiza mediante electroforesis en gel, transferencia e hibridación con sondas marcadas específicas y detección. La técnica de transferencia Northern se realiza de la siguiente manera.
- El ARN se extrae de la muestra y se separa por electroforesis en gel.
- El ARN se transfiere del gel a una membrana de transferencia y se fija.
- La membrana se trata con una sonda marcada preparada a partir de ADNc o ARN (la sonda es complementaria a una secuencia específica en la muestra).
- La sonda se incuba con la membrana para unirse con una secuencia específica.
- Las sondas no unidas se lavan.
- Los fragmentos hibridados son detectados por un autorradiógrafo.
La transferencia Northern es una herramienta importante en la detección y cuantificación del ARNm hibridado, el estudio de la degradación del ARN, la evaluación de la vida media del ARN, la detección del empalme de ARN, el estudio de la expresión génica, etc.
Figura 02: Northern Blotting
¿Qué es la transferencia Western??
Western Blotting es un método para detectar una proteína específica de una mezcla de proteínas mediante el uso de anticuerpo marcado. Por lo tanto, Western Blot también se conoce como un inmunotransferencia. Esta técnica fue introducida por Towbin et al en 1979 y ahora se realiza rutinariamente en los laboratorios para el análisis de proteínas. Los pasos son los siguientes.
- Las proteínas se extraen de la muestra
- Las proteínas están separadas por sus tamaños utilizando electroforesis en gel de poliacrilamida
- Las moléculas separadas se transfieren a una membrana de PVDF o membrana de nitrocelulosa por electroporación
- La membrana está bloqueada para una unión inespecífica con los anticuerpos
- Las proteínas transferidas están unidas con anticuerpo primario (anticuerpos marcados con enzimas).
- La membrana se lava para eliminar los anticuerpos primarios unidos no específicamente
- Los anticuerpos unidos se detectan agregando un sustrato y detectando el precipitado de color formado
La transferencia Western es útil en la detección de anticuerpos anti-VIH en una muestra de suero humano. Western Blot también se puede utilizar como prueba confirmatoria para la infección por hepatitis B y prueba definitiva para la enfermedad de las vacas locas.
Figura 03: Western Blotting
¿Cuál es la diferencia entre el norte del sur y la transferencia Western?
Northern vs Southern vs Western Blotting | |
| Tipo de molécula detectada | |
| Transferencia de norte | Northern Blotting detecta una secuencia de ARN específica de una muestra de ARN. |
| Transferencia Southern | Southern Blotting detecta una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN. |
| Transferencia Western | La transferencia Western detecta una proteína específica de una muestra de proteína. |
| Tipo de gel | |
| Transferencia de norte | Esto usa gel de agarosa/formaldehído. |
| Transferencia Southern | Esto usa un gel de agarosa. |
| Transferencia Western | Esto usa gel de poliacrilamida. |
| Método de transferencia | |
| Transferencia de norte | Esta es una transferencia capilar. |
| Transferencia Southern | Esta es una transferencia capilar. |
| Transferencia Western | Esta es una transferencia eléctrica. |
| Sondas utilizadas | |
| Transferencia de norte | Probaciones de ADNc o ARN marcadas de forma radioactiva o no radical. |
| Transferencia Southern | Las sondas de ADN se etiquetan de forma radioactiva o no radioactiva. |
| Transferencia Western | Los anticuerpos primarios se utilizan como sondas. |
| Sistema de detección | |
| Transferencia de norte | Esto se realiza utilizando un autorradiografía o detección de luz o cambio de color. |
| Transferencia Southern | Esto se realiza utilizando un autorradiografía, detección de luz o cambio de color. |
| Transferencia Western | Esto se realiza utilizando la detección de luz o cambio de color. |
Resumen -Northern vs Southern vs Western Blotting
La transferencia es una técnica especial desarrollada para la identificación de ADN, ARN o proteína específicos de las muestras. Hay tres procedimientos de transferencia separados, a saber, el norte, sur y occidental, para detectar un tipo específico de molécula. La técnica de transferencia Northern está diseñada para detectar una secuencia de ARN específica de una mezcla de ARN. La técnica de transferencia Southern permite la detección de una secuencia de ADN específica de una muestra de ADN y se desarrolla la técnica de transferencia Western para identificar una proteína específica de una mezcla de proteínas.
Referencias
1. Gibbons, Janay. "Western Blot: descripción general de transferencia de proteínas."North American Journal of Medical Sciences. Mednow Publications & Media Pvt Ltd, MAR. 2014. Web. 27 mar. 2017
2. Marrón, t. "Southern Blotting."Protocolos actuales en inmunología. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, mayo de 2001. Web. 27 mar. 2017
3. Él, shan l. "Norte de mancha."Métodos en enzimología. U.S. Biblioteca Nacional de Medicina, 2013. Web. 27 mar. 2017
Imagen de cortesía:
1. "Esquema de transferencia Northern" de RNA405 - Trabajo propio (dominio público) a través de Commons Wikimedia
2. "Western Blot 114a" de Amanthabagdon - Trabajo propio (dominio público) a través de Commons Wikimedia
