Diferencia entre la capa delgada de papel y la cromatografía de columna

Diferencia de llave: papel vs capa delgada vs Columna Cromatografía
 

La cromatografía en papel, la cromatografía de capa delgada y la cromatografía de columna son tres tipos de técnicas cromatográficas. El diferencia clave Entre la cromatografía en papel, la cromatografía de capa delgada y la cromatografía de columna se basan en el tipo de fase estacionaria utilizada en la técnica de cromatografía. La cromatografía en papel utiliza un papel de celulosa como su fase estacionaria, la cromatografía de capa delgada utiliza gel de alúmina o sílice como fase estacionaria, mientras que la cromatografía de columna utiliza una columna empaquetada con un material de matriz adecuado como fase estacionaria.

En el proceso de separación e identificación de biomoléculas como proteínas y carbohidratos, la cromatografía es una técnica biofísica importante utilizada. La cromatografía separa los compuestos basados ​​en su solubilidad, tamaño y carga. Basado en el mecanismo de separación, la cromatografía utiliza mecanismos como el intercambio de iones, la absorción, la partición y la exclusión del tamaño y hay tres técnicas cromatográficas; a saber, papel, capa delgada y cromatografía de columna. La cromatografía en papel se basa en la adsorción y solubilidad del compuesto, y utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria. La cromatografía de capa delgada se basa en la adsorción sólida-líquido de moléculas. Tiene una fase estacionaria que generalmente está hecha de alúmina o gel de sílice y la fase móvil que es el solvente. La cromatografía de columna utiliza una columna repleta de una matriz que se utiliza para separar las moléculas principalmente en función de su tamaño, afinidad o su carga.

CONTENIDO

1. Descripción general de la cromatografía y la diferencia clave
2. ¿Qué es la cromatografía de papel?
3. ¿Qué es la cromatografía de capa delgada?
4. ¿Qué es la cromatografía de columna?
5. Similitudes entre el papel, la capa delgada y la cromatografía de columna
6. Comparación de lado a lado - cromatografía de columna de capa vs de capa delgada frente a la columna en forma tabular
7. Resumen

¿Qué es la cromatografía de papel??

La cromatografía en papel es el tipo más simple de cromatografía utilizada, y no se utiliza para una investigación extensa. Se utiliza principalmente en laboratorios estudiantiles para identificar biomoléculas como aminoácidos y carbohidratos presentes en mezclas. La cromatografía en papel utiliza una fase estacionaria que se realiza con papel de celulosa o papel de filtro Whatman y una fase móvil que generalmente se prepara usando solventes orgánicos como N-butanol, etc. La fase estacionaria está saturada de agua, lo que hace que la fase estacionaria sea líquida. Por lo tanto, cuando los compuestos se ven y se permiten funcionar en presencia de la fase móvil, dependiendo de la solubilidad de los compuestos, están separados. Por lo tanto, tras el desarrollo del cromatograma, se puede hacer tinción para determinar la ejecución de cada compuesto. El factor de retención se puede calcular así.

Figura 01: cromatografía en papel

La cromatografía en papel se puede clasificar aún más como cromatografía de papel ascendente y cromatografía de papel descendente dependiendo de la dirección del solvente de carrera.

¿Qué es la cromatografía de capa delgada??

Cromatografía de capa delgada o TLC es una técnica de uso común para identificar diferentes aminoácidos presentes en una mezcla o para la identificación de proteínas. La técnica de separación se basa en la adsorción sólida-líquido. Durante la cromatografía de capa delgada, se usa una placa hecha de alúmina o gel de sílice como fase estacionaria. La mezcla de solvente varía según el requisito y puede usar diferentes combinaciones de compuestos orgánicos como N-butanol, ácido acético y agua para preparar el solvente. Los compuestos a separar se ven en la placa y se sumergen en la mezcla de solventes. Una vez que el solvente viaja en función de la acción capilar dada por la placa, los compuestos vistos en la placa también se mueven dependiendo de su solubilidad en el solvente.

Figura 02: cromatografía de capa delgada

La detección de los puntos después del cromatograma se ejecuta mediante diferentes procedimientos de tinción. Algunos usan tinción de ninhidrina que es bastante un método tóxico de tinción. Los cromatogramas modernos de capa delgada utilizan técnicas de fluorescencia para ver el cromatograma después de la ejecución. Dependiendo de las distancias que ha recorrido, se puede calcular el tiempo de retención de cada compuesto. Esto se puede utilizar para identificar el tipo de compuesto separado en función de la mezcla utilizada. TLC se usa principalmente para identificar aminoácidos en una mezcla de proteínas y también para separar diferentes tipos de monosacáridos presentes en una mezcla.

¿Qué es la cromatografía de columna??

La cromatografía de columna es un término amplio utilizado para describir muchos tipos de técnicas de cromatografía que utilizan el método de separación basado en columnas. En la cromatografía de columna, se usa una columna física con un material de embalaje para separar los compuestos. La separación puede basarse en diferentes propiedades físicas exhibidas por los compuestos. Estas propiedades pueden ser la carga, el tamaño, la conformación 3D y la capacidad de unión, etc. Por lo tanto, la columna empaquetada con el material de la matriz actúa como la fase estacionaria y el tampón de lavado aplicado a la columna actúa como la fase móvil.

Si las moléculas se separan según el tamaño, el material de embalaje está empaquetado de una manera que deja poros para que los compuestos viajen. Por lo tanto, las moléculas más grandes que no pueden fluir a través de los poros se eluyen primero, mientras que las moléculas más pequeñas tardan mucho más en eluir.

Figura 03: cromatografía en columna

Si las moléculas se separan en función de su carga, la fase estacionaria contendrá un intercambiador de anión o catión al que los compuestos se sentirán atraídos en función de su carga. Así, durante el paso de lavado, los compuestos no vinculados serán eluyados. Al agregar el búfer de elución, los compuestos cargados unidos serán eluyentes. La detección de estos eluyentes se basa principalmente en técnicas espectrofotométricas.

¿Cuáles son las similitudes entre la capa delgada de papel y la cromatografía de columna??

• Toda la cromatografía de la capa delgada y la columna de papel se utilizan tres técnicas para la separación de biomoléculas como aminoácidos, proteínas y carbohidratos.
• Las técnicas de cromatografía de columna y capa delgada de papel tienen una fase móvil y una fase estacionaria.
• Técnicas de cromatografía de capa delgada y columna de papel utilizan mecanismos biofísicos para la separación.

¿Cuál es la diferencia entre la capa delgada de papel y la cromatografía de columna??

Resumen - Paper delgada capa vs Columna Cromatografía

La cromatografía en papel, la cromatografía TLC y la columna son técnicas de separación utilizadas para separar biomoléculas como proteínas, aminoácidos y carbohidratos (principalmente monosacáridos). La cromatografía en papel utiliza un papel de celulosa como fase estacionaria, y el mecanismo de separación se basa en la adsorción sólida-líquido. TLC también utiliza mecanismos de adsorción sólidos-líquidos. Las moléculas se separan en la fase estacionaria, dependiendo de su solubilidad en la fase móvil. La cromatografía de columna utiliza propiedades físicas como tamaño, forma, carga y el peso molecular del compuesto para separar. La columna empaquetada con el material de la matriz actúa como la fase estacionaria, mientras que el tampón de lavado actúa como la fase de solvente. Esta es la diferencia entre una capa delgada de papel y cromatografía de columna.

Referencia:

1.Clark, Jim. " CROMATOGRAFÍA DE CAPA FINA."Cromatografía de capa delgada, 2007. Disponible aquí 
2.Coskun, Ozlem. "Técnicas de separación: cromatografía."Northern Clinics of Estambul, Kare Publishing, 2016. Disponible aquí 

Imagen de cortesía:

1.'Tanque de cromatografía' (CC BY-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia  
2.'TLC SECUENCIA' BY CUANTOCKGOBLIN, (dominio público) a través de Commons Wikimedia
3.'Cromatografía de columna' (dominio público) a través de Commons Wikimedia