Diferencia entre los cebadores aleatorios y Oligo DT
El diferencia clave entre los cebadores aleatorios y el oligo dt es que El cebador aleatorio es una mezcla de todas las posibles secuencias de oligonucleótidos de hexamer, mientras que el cebador Oligo DT consiste en un estiramiento monocatenario de 12-18 desoxitimidinas.
La transcripción inversa es un mecanismo en el que el ADNc se puede sintetizar usando ARNm o cualquier especie de ARN. Para producir ADNc, se deben proporcionar una enzima transcriptasa inversa y otros componentes necesarios, especialmente las plantillas y los cebadores. Los cebadores son las secuencias de ADN cortas diseñadas específicamente para la amplificación de las secuencias objetivo. Los cebadores aleatorios y los cebadores Oligo DT son dos tipos comunes de cebadores utilizados en la transcripción inversa. Por lo tanto, el cebador aleatorio o el cebador Oligo DT son secuencias de oligonucleótidos de ADN cortas requeridas para la transcriptasa inversa para iniciar la transcripción inversa. Dependiendo de la plantilla de ARN, el cebador adecuado se puede seleccionar de estos dos tipos de cebadores.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué son los cebadores aleatorios?
3. ¿Qué es oligo dt?
4. Similitudes entre cebadores aleatorios y oligo dt
5. Comparación de lado a lado: cebadores aleatorios vs oligo dt en forma tabular
6. Resumen
¿Qué son los cebadores aleatorios??
El imprimador aleatorio es una mezcla de oligonucleótidos que representan todas las secuencias posibles de hexamer. La secuencia de cebador de cebador aleatorio es 5 ' - D (nnnnnnn) -3' n = g, a, t o c. Por lo tanto, se pueden usar cebadores aleatorios para la amplificación de ADN o ARN monocatenario por ADN polimerasa o transcriptasa inversa, respectivamente. Además, la mezcla de cebadores aleatorios es capaz de amplificar todas las regiones del ARN para generar ADNc. Por lo tanto, produce varias longitudes de ADNc.
Figura 01: Primeros aleatorios
Lo más importante, la mezcla de cebadores aleatorios no muestra especificidad de plantilla. Es incapaz de distinguir ARNm y otras especies de ARN. Y, se recoce con cualquier especie de ARN en la muestra. Sin embargo, la mezcla de cebadores aleatorios es adecuada para la transcripción inversa de ARN sin colas de poli (a), como rRNA, tRNA, ARN no codificantes, ARN pequeño, ARNm procariota, etc., ARN degradado y ARN con estructuras secundarias conocidas.
¿Qué es oligo dt??
Oligo DT Primer es un tramo de 12 - 18 desoxitimina (DT). La secuencia del cebador se puede representar como 5'-D (ttt ttt ttt ttt ttt ttt) -3. Se utiliza para la producción de ADNc de ARNm que contiene poli (a) cola. Básicamente, actúa como un cebador para la reacción catalizada por la transcriptasa inversa. Durante la transcripción inversa, el imprimación Oligo DT se recubre con la cola poli-adenilada que se encuentra en el extremo de 3 'de la mayoría de los ARNm eucariotas y comienza el proceso.
Figura 02: Transcripción inversa usando Oligo DT Primer
A diferencia de la imprimación aleatoria, Oligo DT Primer no es adecuado para ARN o ARN degradado que carecen de colas de poli (a), incluidos ARN procariota y microARNA.
¿Cuáles son las similitudes entre los cebadores aleatorios y Oligo DT??
- Primer aleatorio y cebador Oligo DT son dos tipos de cebadores que se utilizan en la transcripción inversa y haciendo ADNc.
- El uso del cebador aleatorio y el cebador Oligo DT juntos aumenta la sensibilidad de la síntesis de ADNc.
- Son secuencias de nucleótidos cortos de cadena individual.
¿Cuál es la diferencia entre cebadores aleatorios y oligo dt??
El imprimador aleatorio es una secuencia de oligonucleótidos corta compuesta de una secuencia aleatoria. Mientras tanto, Oligo DT Primer es un hilo corto compuesto de 12 a 18 desoxitimidinas. Entonces, esta es la diferencia clave entre los cebadores aleatorios y Oligo DT. La secuencia de cebador aleatorio es 5 ' - D (nnnnnnn) -3' n = g, a, t o c. Mientras que, la secuencia de cebador Oligo DT es 5'-D (ttt ttt ttt ttt ttt ttt) -3 '. Por lo tanto, podemos considerar esto como otra diferencia entre los cebadores aleatorios y Oligo DT.
Además, los cebadores aleatorios no muestran especificidad de la plantilla, y se recocen con cualquier especie de ARN, mientras que los cebadores oligo DT muestran especificidad para las colas de poli (a) de ARNm eucariota.
La siguiente infografía resume la diferencia entre los cebadores aleatorios y Oligo DT.
Resumen - Primeros aleatorios vs Oligo DT
Primer aleatorio y cebador Oligo DT son dos tipos de cebadores utilizados en la síntesis de ADNc. El imprimador aleatorio consiste en una mezcla de oligonucleótidos, que representan todas las secuencias de hexámero posibles, mientras que Oligo DT Primer es una secuencia monocatenaria de 12 a 18 desoxitimidinas. Entonces, esta es la diferencia clave entre los cebadores aleatorios y Oligo DT. Además, los cebadores Oligo DT son útiles para la transcripción inversa de ARN de longitud completa con cola de poli (a), mientras que los cebadores aleatorios son útiles para la transcripción inversa de la mayoría de las especies de ARN, incluido el ARN degradado, el ARN que carecen de poli (a) colas y ARN que contienen ARN estructuras secundarias. Por lo tanto, el cebador aleatorio no muestra especificidad de la plantilla, mientras que Oligo DT Primer muestra especificidad hacia el ARNm eucariota que contiene poli (a) cola.
Referencia:
1. "Configuración de transcripción inversa: Thermo Fisher Scientific - EE. UU."Configuración de transcripción inversa | Thermo Fisher Scientific - US, disponible aquí.
Imagen de cortesía:
1. "Primers RevComp" de Zephyris - Trabajo propio (CC By -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia
2. "Modelo de PCR RT" de Lokeshthimmana - Trabajo propio (CC By -SA 4.0) a través de Commons Wikimedia
