Diferencia entre RT PCR y QPCR

Diferencia de claves: RT PCR vs QPCR
 

La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica utilizada para amplificar una región específica de ADN in vitro. Debido a la invención de esta técnica de Kary Mullis en 1983, los científicos pueden hacer mil a millones de copias de fragmentos de ADN específicos para fines de investigación. Actualmente se ha convertido en una técnica común y de forma rutinaria en laboratorios clínicos y de investigación para una amplia variedad de aplicaciones. Hay variaciones de la técnica de PCR tradicional como PCR RT, PCR anidada, PCR multiplex, PCR Q, RT - QPCR, etc. RT PCR y Q PCR son dos variaciones importantes de PCR. La diferencia clave entre RT PCR y Q PCR es que RT PCR se usa para detectar la expresión génica a través de la creación deADN complementario (ADNc) Transcripciones de ARN mientras Q PCR se usa para medir cuantitativamente los productos de PCR en tiempo real utilizando tintes fluorescentes.

CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es RT PCR?
3. ¿Qué es QPCR?
4. Comparación de lado a lado - RT PCR vs QPCR
5. Resumen

¿Qué es RT PCR??

La reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa (RT PCR) es una variante de PCR que se usa para detectar la expresión de ARN. Es un método muy importante para detectar la expresión de ARNm en los tejidos. RT PCR se emplea cuando el material de partida de la muestra es ARN. En RT PCR, el ARNm de plantilla se convierte primero en ADN complementario. Este paso es catalizado por la transcriptasa inversa de la enzima y el proceso se conoce como transcripción inversa. En segundo lugar, la PCR tradicional se emplea para el ADNc recientemente sintetizado para la amplificación.

RT PCR es una técnica altamente sensible que requiere una cantidad relativamente pequeña de muestra de ARN. La PCR RT se usa comúnmente en el diagnóstico y cuantificación de las especies de ARN, especialmente los virus de ARN, como el virus de la inmunodeficiencia humana y el virus de la hepatitis C.

Figura 01: técnica de PCR RT

¿Qué es QPCR??

La PCR cuantitativa (QPCR) es una variante de PCR que se utiliza para medir cuantitativamente los productos de PCR. También se conoce como reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real, ya que mide la amplificación de tiempo real utilizando la máquina PCR en tiempo real. Es un método adecuado para determinar la cantidad de una secuencia objetivo o un gen presente en una muestra. La característica interesante de QPCR es que combina la amplificación y la cuantificación verdadera en un solo paso. Por lo tanto, la necesidad de electroforesis en gel en la detección puede ser eliminada por la técnica QPCR. QPCR utiliza colorantes fluorescentes para etiquetar los productos de PCR durante las reacciones de PCR que eventualmente conducen a cuantificación directa. Cuando se acumulan los productos de PCR, las señales fluorescentes también se acumulan y la máquina de tiempo real lo medirá. QPCR se puede combinar con RT PCR. Se conoce como RT - QPCR o QRT - PCR y se considera un método más potente, sensible y cuantitativo para la detección de niveles de ARN en las células o tejidos.

Sybr Green y Taqman son dos métodos empleados para detectar o ver el proceso de amplificación de la PCR en tiempo real. El método SYBR Green se lleva a cabo utilizando un tinte fluorescente llamado SYBR Green y detecta la amplificación uniendo el tinte para producir ADN de doble cadena. Taqman se lleva a cabo utilizando sondas de doble etiqueta y detecta la amplificación por degradación de la sonda por Taq polimerasa y las liberaciones del fluoróforo como se muestra en la Figura 02. Ambos métodos monitorean el progreso del proceso de amplificación e informan la cantidad del producto en tiempo real.

La PCR en tiempo real tiene una amplia variedad de aplicaciones, como cuantificación de expresión génica, microARN y análisis de ARN no codificante, genotipado de SNP, detección de variantes de número de copias, detección de mutaciones raras, detección de organismos genéticamente modificados, detección de agentes infecciosos, etc.

Figura 02: técnica de PCR cuantitativa

¿Cuál es la diferencia entre RT PCR y QPCR??

Resumen - RT PCR vs QPCR

RT PCR y QPCR son dos versiones de PCR tradicional. La técnica de PCR RT se realiza para muestras de ARNm y es impulsada por la transcripción inversa y la producción de ADNc. QPCR se usa para cuantificar los productos de PCR durante los ciclos térmicos de PCR en tiempo real utilizando colorantes fluorescentes o sondas marcadas. En QPCR, la cantidad de productos de PCR está representada por las señales fluorescentes emitidas por la muestra. RT PCR se usa popularmente como un proceso de amplificación, mientras que el QPCR se usa comúnmente como un proceso de cuantificación. Esta es la diferencia entre RT PCR y QPCR.

Referencias:
1. Deepak, SA, Kr Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, y. Masuo y GK Agrawal. "PCR en tiempo real: revolucionar el análisis de detección y expresión de genes."Genómica actual. Bentham Science Publishers Ltd., Junio ​​de 2007. Web. 03 abril. 2017
2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els de Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh y Jo Vandesompele. "Análisis de expresión génica basado en RT-QPCR directo y sensible de muestras de FFPE."Naturaleza Noticias. Nature Publishing Group, 22 de febrero. 2016. Web. 03 abril. 2017
3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, r. Caldo. Mathieu. "El uso de PCR de transcriptasa inversa en tiempo real para la cuantificación de la expresión génica de citoquinas.Revista de técnicas biomoleculares: JBT. La Asociación de Instalaciones de Recursos Biomoleculares, MAR. 2003. Web. 03 abril. 2017

Imagen de cortesía:
1. "Taqman" por usuario: BrainDamaged- Trabajo propio del cargador original (dominio público) a través de Commons Wikimedia
2. "Reacción en cadena de la polimerasa de transcripción inversa" por JPark623 - Trabajo propio (CC BY -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia