Diferencia entre SYBR Green y Taqman

Diferencia clave - Sybr Green vs Taqman
 

Sybr Green y Taqman son dos métodos empleados para detectar o ver el proceso de amplificación de la PCR en tiempo real. SYBR Green es un método basado en la intercalación de tinción con ácido nucleico, mientras que Taqman es un método basado en la sonda de hidrólisis. Ambas tecnologías están diseñadas para generar fluorescencia durante la PCR, lo que permite que la máquina de PCR en tiempo real monitoree la reacción en "tiempo real". El método SYBR Green se lleva a cabo utilizando un tinte fluorescente llamado SYBR Green y detecta la amplificación uniendo el tinte al ADN de doble cadena producida. Taqman se lleva a cabo utilizando sondas de doble etiqueta y detecta la amplificación por degradación de la sonda por Taq polimerasa y liberaciones del fluoróforo. Esta es la diferencia clave entre SYBR Green y Taqman.

CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. Que es sybr green
3. Que es taqman
4. Comparación de lado a lado - Sybr Green vs Taqman
5. Resumen

Que es sybr green?

SYBR Green es un tinte fluorescente utilizado para manchar los ácidos nucleicos, especialmente el ADN de doble cadena en biología molecular. El método SYBR Green se utiliza para cuantificar los productos de PCR durante la PCR en tiempo real. Una vez que se une con el ADN, el complejo de tinte de ADN resultante absorbe la luz azul y emite una intensa luz verde. Ocurre debido al cambio estructural que ocurre en la molécula de tinte al unirse con ADN de doble cadena. Cuando la PCR crea más y más ADN, más moléculas de tinte se unen con el ADN, generando más fluorescencia. Por lo tanto, la fluorescencia aumenta con la acumulación de productos de PCR. Por lo tanto, la cantidad de producto de PCR puede medirse cuantitativamente mediante la detección de fluorescencia verde SYBR.

El tinte verde SYBR también se puede usar para el marcado de ADN en citometría y microscopía fluorescente. El bromuro de etidio ha sido reemplazado con éxito por SYBR Green ya que el bromuro de etidio es un tinte cancerígeno con problemas de eliminación durante la visualización de ADN en la electroforesis en gel.

Hay ventajas y desventajas del método SYBR Green. Este método es muy sensible, económico y fácil de usar. Sin embargo, debido a su capacidad de unirse a cualquier ADN doble cadena, la unión inespecífica puede conducir a la cuantificación excesiva del producto PCR.

Figura 01: Técnica SYBR Green

Que es taqman?

Taqman es un método alternativo para SYBR Green para monitorear el proceso de PCR en tiempo real. Este método depende de la actividad de exonucleasa 5 ' - 3' de la enzima Taq polimerasa para degradar las sondas durante la extensión del nuevo hilo y la liberación de fluoróforo. Las sondas de doble etiqueta se utilizan en este método y se basa en la hidrólisis de las sondas. Las sondas son oligonucleótidos de ADN marcados con fluorescencia que tienen una molécula reportera fluorescente (fluoróforo) en el extremo 5 'y una molécula de enfriamiento en el extremo de 3'. Están diseñados para unirse a la plantilla de una sola cadena en el lado opuesto de los recocidos de la imprimación. Taq polimerasa agrega nucleótidos al cebador y extiende el nuevo hilo hacia las sondas de doble etiqueta. Una vez que la polimerasa Taq cumple con la sonda, la acción de exonucleasa de la polimerasa Taq se activa y degrada la sonda. Una vez que completa la síntesis de la nueva hebra, la sonda está sujeta a una degradación completa y libera el fluoróforo. La liberación de fluoróforo genera fluorescencia. La molécula de enfriamiento fluorescente apaga de manera eficiente la luz emitida y crea la salida para la cuantificación del producto de PCR. La liberación de fluoróforos y la cantidad de los productos de PCR son proporcionales. Por lo tanto, la cuantificación se puede hacer fácilmente mediante el método Taqman.

Figura 02: Método Taqman

El método TaqMan se usa en PCR en tiempo real, cuantificación de la expresión génica, detección de polimorfismos genéticos, cuantificación de deleciones de ADN cromosómica, identificación bacteriana, verificación del análisis de microarrays, genotipado de SNP, etc.

¿Cuál es la diferencia entre Sybr Green y Taqman??

Resumen -Sybr Green y Taqman

Taqman y Sybr Green son dos métodos empleados en PCR en tiempo real (PCR cuantitativa). Ambos métodos permiten la cuantificación del producto PCR de manera eficiente y confían en la emisión de la fluorescencia. El método Taqman utiliza sondas de doble etiqueta para la detección del ADN acumulado, mientras que el método SYBR Green utiliza un tinte fluorescente. Ambos métodos también tienen diferentes aplicaciones en biología molecular.

Referencia:
1. Tajadini, Mohamad Hasan, Mojtaba Panjehpour y Shaghayegh Haghjooy Javanmard. "Comparación de los métodos SYBR Green y TaqMan en el análisis cuantitativo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real de cuatro subtipos de receptores de adenosina."Investigación biomédica avanzada. Mednow Publications & Media Pvt Ltd, 2014. Web. 13 de mar. 2017.
2. "Principios básicos de PCR en tiempo real."PCR en tiempo real, cuantitativo (QPCR), Primeros y MasterMix: PrimerDesign Ltd. norte.pag., norte.d. Web. 13 de mar. 2017.
3. "Sybr Green y otros tintes de PCR en tiempo real."Biocompare. norte.pag., 05 abril. 2010. Web. 14 mar. 2017

Imagen de cortesía:
1. "PCR con Sybr Green" por -ygonaar 23:09, 7 de marzo de 2006 (UTC): es un gráfico creado por Ygonaar con Power Point, CC By -SA 3.0, https: // commons.Wikimedia.org/w/índice.php?Curido = 619528
2. "Taqman" por el usuario: BrainDamaged - Trabajo propio (dominio público) a través de Commons Wikimedia