Diferencia entre la ADN ligasa de T4 y T7

Diferencia de clave: T4 vs T7 ADN ligasa
 

La ADN ligasa es una enzima importante utilizada en las técnicas de biología molecular. Funciona como un pegamento molecular para unir los nucleótidos formando enlaces fosfodiesteros entre nucleótidos. Los enlaces fosfodiesteros se forman entre el extremo hidroxilo de 3 'del resto de azúcar y el grupo de fosfato final 5'. La ADN ligasa es vital en el proceso de replicación para unirse a los fragmentos de Okazaki de la cadena rezagada y durante los mecanismos de reparación de ADN y in vitro Experimentos de clonación para unir el gen de interés deseado para el genoma del vector. Hay dos ligasas de ADN principales utilizadas actualmente por biólogos moleculares: ligasas de ADN T4 y T7. La ADN ligasa de T4 es una de las primeras enzimas que se aislarán del bacteriófago T4. La ADN ligasa de T7, que es una proteína más pequeña, es una enzima aislada del bacteriófago T7. Esta es la diferencia clave entre las ligasas de ADN T4 y T7.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Cuál es la acción de la ADN ligasa?
3. ¿Qué es T4 ADN ligasa?
4. ¿Qué es T7 ADN ligasa?
4. Similitudes entre la ADN ligasa de T4 y T7
5. Comparación lado a lado - T4 vs T7 ADN ligasa en forma tabular
6. Resumen

¿Cuál es la acción de la ADN ligasa??

La ligadura de ADN ocurre en una reacción de tres pasos. El primer paso es un ataque nucleofílico en el alfafósforo de ATP que genera un intermedio de enzima-adenilato covalente en el que el AMP está vinculado al nitrógeno de la cadena lateral terminal de lisina. En el segundo paso, se produce un ataque nucleofílico en el fósforo del adenilato enzimático por el sustrato de ADN terminado por 5'-fosfato, liberando lisina y formando ADN-adenilato. En el último paso, el ADN-adenilato es atacado por 3'- Oh de otro hilo de ADN, liberando el amplificador y uniendo los polinucleótidos.

¿Qué es T4 ADN ligasa??

T4 Ligase fue la primera ligasa que se aisló e identificó por Meselson, Weigle y Kellenberger y fue la primera ligaed comercial producida. La ADN ligasa de T4 es una enzima dependiente de ATP que cataliza la formación de enlaces fosfodiéster. Es una sola cadena de polipéptidos con 487 residuos de aminoácidos y tiene un peso molecular de aproximadamente 77 kDa. El pH óptimo para su actividad se encuentra en el rango de 7.5 - 8.

Figura 01: T4 ADN ligasa

La ADN ligasa de T4, como su nombre, está presente en el bacteriófago T4 y se aisló cuando el fago produjo la enzima tras la infección con -mi. coli. La enzima liga a dúplex de ADN de doble cadena con extremos contundentes y los fragmentos que se unen deben estar muy cerca el uno del otro.

¿Qué es T7 ADN ligasa??

La ligasa T7 es de 41 kDa proteína producida por el bacteriófago T7 y se aislan por infecto mi. coli células. La función principal de la ligasa T7 es ligar los dúplex de ADN a través de los enlaces de fosfodiéster y unir fragmentos de ADN cercanos durante los experimentos de clonación. El pH óptimo para la ADN ligasa de T7 se encuentra en el rango de 7.0 - 7.2. La ligasa T7 depende de ATP. Las ligasas de ADN T7 también son capaces de recocir híbridos de ADN y ARN, dando lugar a conformaciones anormales durante la transcripción; Sin embargo, este fenómeno aún está bajo investigación por in vitro estudios.

¿Cuáles son las similitudes entre la ADN ligasa de T4 y T7??

• La ADN ligasa de T4 y T7 participa en una reacción de ligadura al recocer los dúplex de ADN a través de la formación de enlaces de fosfodiéster entre 3 'OH y el extremo de fosfato 5' del fragmento de ADN.
• Ambas enzimas ligan dúplex de ADN terminados que están muy cerca entre sí.
• Ambas enzimas dependen de ATP.
• Estas enzimas se aislan por infectar mi. coli células con el bacteriófago particular.
• Las aplicaciones de ambas enzimas incluyen:
  • Clonación molecular: para ligar el gen de interés para el vector
  • Reparación de ADN: para reparar nichos de doble cadena
  • Replicación de ADN in vitro
  • Reacción en cadena de ligasa

¿Cuál es la diferencia entre la ADN ligasa de T4 y T7??

Resumen -T4 vs T7 ADN ligasa

Las ligasas de ADN son una clase importante de enzimas involucradas en la clonación molecular para producir moléculas de ADN recombinantes que contienen el gen de interés. La reacción de ligadura es una reacción de la energía que utiliza y existen nuevos estudios de investigación en curso para mejorar la precisión mediante la modulación de las ligasas disponibles. Las ligasas de ADN T4 y T7 son dos tipos de enzimas de ligasa de ADN importantes utilizadas en técnicas biológicas moleculares. La ADN ligasa de T7 también es el resultado de la investigación que se basó en la ligasa primaria aislada de T4 infectada mi. coli. T7 se retrata más eficiencia y precisión para llevar a cabo su función debido a su tamaño más pequeño. Esta es la diferencia entre la ligasa T4 y T7.

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Referencias:

1. "ADN ligasa, T4."ADN ligasa, T4 - Manual de enzimas de Worthington, disponible aquí. Consultado el 22 de agosto. 2017.
2. Doherty, Aidan J., et al. "Bacteriófago T7 ADN ligasa sobreexpresión, purificación, cristalización y caracterización."Journal of Biological Chemistry, 10 de mayo de 1996, disponible aquí. Consultado el 22 de agosto. 2017.

Imagen de cortesía:

1. "Figura 3. Ayuda de férula ARNA de ADN de ADN de ADN T4 ligera ligera."(CC por 3.0) a través de Commons Wikimedia