La transfección es un proceso involucrado en la transferencia de genes de células eucariotas utilizando métodos químicos o físicos. La transfección se puede clasificar en dos tipos principales llamados transfección transitoria y transfección estable. Durante la transfección transitoria, el gen de interés no se integra con el genoma del huésped y se expresa temporalmente dentro del huésped a corto plazo, mientras que, en la transfección estable, el gen de interés se integra con el genoma del huésped y se mantiene a largo plazo en varias generacioness. Esta es la diferencia clave entre la transfección transitoria y estable. En ambos casos, la transfección es exitosa y los genes se expresan.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la transfección transitoria?
3. ¿Qué es la transfección estable?
4. Comparación lado a lado: transfección transitoria vs estable
5. Resumen
La transfección es una herramienta importante para insertar genes en células eucariotas. Entre los dos tipos de transfección, la transfección transitoria es una forma común en la transferencia de genes. A través de un vector, los genes extraños se transforman dentro de las células huésped. Una vez que el ADN extraño ingresa a la célula huésped, tiene dos opciones. Puede integrarse con el genoma del huésped y replicar, o permanecer adentro sin integrarse en el genoma. La transfección transitoria exhibe la expresión temporal de los genes insertados sin integrarse en el genoma del huésped. Los genes expresan y producen la proteína codificada hasta que la célula se divide. Sin embargo, debido a la incapacidad de la integración, no puede replicarse y entrar en generaciones futuras. Este tipo de transfección es exitoso por un corto período de tiempo. Durante la división celular o debido a algunos otros factores, el ADN extraño se somete a la degradación. La transfección transitoria se muestra cuando el ADN extraño está en forma de ADN altamente enrollado.
Figura 01: Transfección transitoria
La transfección estable muestra una exitosa integración de genes extranjeros en el genoma del huésped. Una vez que el ADN extraño entra dentro de la célula huésped, parte del ADN extraño se integra con el genoma del huésped y se convierte en parte de la misma. Por lo tanto, el ADN extranjero también se reproduce y pasa a las generaciones futuras cuando el genoma del huésped replica. Este tipo de transfección es complejo y raro. Sin embargo, debido a la transfección estable al genoma, este rasgo se mantiene durante un período más largo de varias generaciones.
La transfección estable es un proceso difícil y requiere una entrega efectiva de ADN y adquisición celular del ADN extraño en su genoma. Por lo tanto, el ADN lineal favorece la transfección estable que el ADN circular. Sin embargo, la tasa de transfección estable es aproximadamente una de cada 104 células transformadas. La transfección estable se puede observar mediante la cotransfomación de un marcador seleccionable y realizar la selección artificial en un medio.
Figura 02: Transfección estable
Transfección transitoria vs estable | |
El ADN extraño no se integra en un genoma del huésped. | El ADN extraño se integra con el genoma del huésped y se convierte en parte de él. |
Replicación dentro del host | |
Los genes transfectados transitorios no se replican dentro del huésped. Por lo tanto, los genes no se pasan a las próximas generaciones. | Los genes se replican dentro del huésped y se pasan a las generaciones futuras. |
Duración de tiempo de la expresión génica | |
Los genes se expresan por un período de tiempo finito y después de eso, se destruyen. | Los genes se convierten en parte del genoma y se expresan dentro de la generación durante un período de tiempo largo. |
Usar | |
Esto es útil para estudiar los efectos de la expresión a corto plazo de genes o productos genéticos. | Esto es útil para estudiar los efectos de las expresiones génicas a largo plazo. |
Detección de la transfección | |
Los genes se expresan y se pueden detectar fácilmente insertando un gen reportero. | La transfección estable se puede detectar fácilmente insertando un marcador seleccionable y seleccionando a través de la selección artificial en los medios. |
Ocurrencia y proceso | |
La transfección transitoria es común y no compleja de realizar. | La transfección estable es rara en ocurrencia y compleja de realizar. |
Naturaleza del ADN | |
El ADN altamente superenrolado es adecuado para la transfección transitoria. | El ADN lineal es adecuado para la transfección estable. |
Aplicaciones | |
Esto se utiliza para estudios de eliminación de genes o silenciamiento con ARN inhibitorios, producción de proteínas a pequeña escala | Esto se utiliza para la producción de proteínas en un estudio de farmacología a largo plazo, terapia génica, investigación sobre los mecanismos de la regulación genética a largo plazo |
Las transfecciones transitorias y estables son dos tipos de transfecciones que se muestran durante la transferencia de genes a las células eucariotas por sistemas no virales basados en virales. El ADN extraño transformado no está integrado con el genoma del huésped en la transfección transitoria, mientras que se integra con el genoma del huésped en la transfección estable. El ADN en espiral circular se muestra transfección transitoria, mientras que el ADN lineal prefiere la transfección estable. Esta es la diferencia entre la transfección transitoria y estable. Sin embargo, la transfección transitoria es más común y fácil en comparación con la transfección estable. Pero la selección de uno entre dos depende del propósito de la transferencia de genes y la duración del proyecto de investigación.
Referencias:
1. Condreay, J. Patrick, Sam M. Witherspoon, William C. Arcilla y thomas a. Kost. “Expresión génica transitoria y estable en células de mamíferos transducidos con un vector de baculovirus recombinante.Actas de la Academia Nacional de Ciencias de los Estados Unidos de América. La Academia Nacional de Ciencias, 05 de enero. 1999. Web. 25 de mar. 2017
2. Kim, Tae Kyung y James H. Eberwine. "Transfección celular de mamíferos: el presente y el futuro."Química analítica y bioanalítica. Springer-Verlag, agosto. 2010. Web. 25 de mar. 2017