Diferencia entre la tripsinización cálida y fría

Diferencia clave: cálido vs Frío Tripsinización
 

La tripsinización cálida y fría son dos métodos utilizados en la desagregación enzimática de células en el cultivo de células animales. El diferencia clave Entre la tripsinización cálida y fría, como sugieren los nombres, depende de la temperatura a la que se agrega la tripsina para la desagregación celular. La tripsinización cálida se lleva a cabo en condiciones de temperatura más alta (36.5 - 37 ⁰C) Mientras que la tripsinización fría se lleva a cabo en condiciones de baja temperatura.

Durante el proceso de cultivo de células primarias de las células animales, hay tres métodos principales utilizados y han demostrado tener éxito. Los tres métodos incluyen la desagregación mecánica de células, la desagregación enzimática de las células y la técnica de explante primario. La desagregación enzimática de las células que conducen al aislamiento de las células y se realiza por la enzima degradante de proteínas tripsina. Por lo tanto, este proceso se conoce como tripsinización. La tripsinización se puede hacer en dos condiciones diferentes, a saber, la tripsinización cálida y la tripsinización fría. La tripsinización cálida es el método de tratar las células con tripsina en condiciones cálidas a una temperatura de 36.5 - 37 ⁰C. La tripsinización fría es el proceso de tratamiento de tripsina que se lleva a cabo en condiciones más frías, preferiblemente en hielo, manteniendo temperaturas muy bajas.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es la tripsinización cálida?
3. ¿Qué es la tripsinización fría?
4. Similitudes entre la tripsinización cálida y fría
5. Comparación de lado a lado: tripsinización caliente vs fría en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es la tripsinización cálida??

Se puede hacer una tripsinización para desglosar los componentes celulares para aislar las células para producir un cultivo celular primario. La tripsina es una enzima de degradación de proteínas, y la mezcla de enzimas utilizada en la tripsinización puede ser un extracto crudo o un producto purificado. Se dice que el extracto crudo es más eficiente en la lisis de proteínas y la desintegración celular, ya que contiene otras enzimas degradativas.

La tripsinización cálida es el método enzimático más utilizado para la desagregación celular que tiene lugar en condiciones de temperatura más alta. Antes del tratamiento por tripsinización, el tejido deseado se pica en pedazos más pequeños. Facilita el proceso fácil de desagregación. El tejido picado se lava en un medio especial conocido como el medio de sal basal de disección.

Al finalizar el paso de lavado, las células se transforman en un matraz que contiene la enzima activa, que es tripsina. Como esta técnica implica un cálido protocolo de tripsinización, la tripsina se coloca a una temperatura de alrededor de 37 ⁰C por unas cuatro horas.

Figura 01: Trypsin

Los contenidos se mezclan y se agitan mediante el uso de métodos de centrifugación para la facilidad del protocolo y para acelerar el proceso de desagregación. Una vez que se alcanza el tiempo recomendado, las células pueden derivarse del sobrenadante. Las células derivadas del sobrenadante se incuban a una temperatura y tiempo particulares.

¿Qué es la tripsinización fría??

La tripsinización fría es el otro tipo de tripsinización que tiene lugar en condiciones de frío. En esta técnica, las células que se cortan y se lavan se colocan en viales en hielo y luego se empapan con tripsina. El período de remojo es mucho más largo, alrededor de 6 a 24 horas.

Después de completar el procedimiento de remojo, la tripsina se retira del lisado celular, y las piezas del tejido se incuban aún más en 37 ⁰C durante unos 20 - 30 minutos. La desagregación de las células se produce por la pipeación repetida de la mezcla de tejido. Esto permitirá que las células se disocien de la membrana y vengan al sobrenadante. Una vez que las células están en el sobrenadante, se incuban y cultivan a una temperatura y período de tiempo deseados.

El método de tripsinización fría tiene varias ventajas

• Mayor rendimiento de células viables a medida que se minimiza el daño celular. El daño celular se minimiza al no usar pasos de centrifugación.
• Método muy conveniente.
• Menos laborioso.

La principal limitación del método de tripsinización fría es que las grandes cantidades no se pueden usar en un caso.

¿Cuáles son las similitudes entre la tripsinización cálida y fría??

• Los procesos de tripsinización cálidos y fríos usan la enzima tripsina para la desagregación de células.
• Los procesos de tripsinización cálidos y fríos se utilizan en los procedimientos de cultivo celular para la desagregación de células.
• En los procedimientos de tratamiento de tripsinización cálida y fría, las células se derivan del sobrenadante.

¿Cuál es la diferencia entre la tripsinización cálida y fría??

Resumen - Cálido vs Frío Tripsinización

La tripsinización es el método de usar la enzima degradante de proteínas tripsina para la desagregación y preparación de cultivos celulares primarios durante el proceso de cultivo celular. Hay dos técnicas principales de tripsinización basadas en las temperaturas utilizadas durante el procedimiento. Son tripsinización cálida y fría. La tripsinización cálida se lleva a cabo en 37 ⁰C mientras que la tripsinización fría se lleva a cabo en condiciones de helado. Aunque la tripsinización fría lleva más tiempo para la finalización, se dice que tiene un mayor rendimiento de células viables. Esto se debe al hecho de que el daño celular se minimiza en la tripsinización fría, ya que no utiliza pasos de centrifugación vigorosos. Esta es la diferencia entre la tripsinización cálida y fría.

Referencia:

1."Tripsinización."Trypsinization - Una descripción general | Temas de ciencias. Disponible aquí 
2."Cultivo celular primario: 3 técnicas (con diagrama)."Discusión de biología, 16 de octubre. 2015. Disponible aquí  

Imagen de cortesía:

1.'Sitio activo de Trypsin' por FDardel - Trabajo propio, (CC BY -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia