La clonación de ADN es un proceso importante que permite la propagación de importantes fragmentos de ADN de los organismos. Requiere unir ADN específico con ADN vectorial para crear ADN recombinante que se transforma en el organismo del huésped. Un vector es una molécula de ADN que se comporta como un vehículo para transportar material genético extraño a otra célula u organismo. Debe ser capaz de replicar dentro del organismo del huésped y producir múltiples copias de ADN recombinante. Hay diferentes tipos de vectores utilizados en la clonación de ADN. Cromosoma artificial de levadura (YAC) y el vector de fago M13 son dos tipos entre ellos. La diferencia clave entre YAC y M13 Phage Vector es que YAC es un cromosoma artificial que replica en las células de levadura mientras El vector de fago M13 es un ADN circular único de bacteriófago M13 que se replica en E. coli células.
CONTENIDO
1. Descripción general y diferencia de claves
2. Que es yac
3. ¿Qué es M13 Phage Vector?
4. Comparación de lado a lado - YAC vs M13 Fage Vector
5. Resumen
YAC es un cromosoma construido artificialmente que tiene la capacidad de transportar un gran segmento de ADN extraño y replicarse dentro de las células de levadura. Tiene centrómero, telómero y replicación de forma autónoma esenciales para la replicación y la estabilidad. YAC también debe soportar un marcador o marcadores selectivos y sitios de restricción para que sea un vector de clonación efectivo. Se pueden insertar secuencias grandes que van desde 1000 kb a 2000 kb en YAC y transferirse a levadura.
Figura 01: YAC Vector
Bacteriófago M13 es un virus que infecta y replica en E. coli. El genoma del bacteriófago M13 es de tamaño pequeño, aproximadamente 6.7 KB. Es un ADN de sentido monocatenario, circular y positivo. Este virus infecta específicamente E. coli Bacterias a través de f pilus. Una vez que ingresa al ssDNA en la bacteria, sintetiza su hilo complementario y se convierte en dsDNA o la forma replicativa (RF) de M13. RF puede comportarse como un plásmido dentro del organismo del huésped. El dsDNA se repite dentro E. coli y produce ssDNA con nuevos fagos. Estos nuevos fagos se liberan continuamente del E. coli sin matar la celda anfitriona. Sin embargo, la infección ralentiza el crecimiento de E coli. El dsDNA se puede extraer de células bacterianas y usarse como vectores en la clonación de ADN. Se conocen como vectores de fago M13. Se pueden manipular y usar fácilmente de manera similar a los vectores plásmidos.
La capacidad inherente de la infección de estos fagos M13 sirve como una buena calificación para ser utilizada como vector en la clonación de genes. Al desarrollar M13 en un vector, se deben incorporar varios elementos a su genoma. Son, un gen para la proteína lac represor (lac i), la región operadora-proximal del Lac Z Gene, un promotor LAC y un sitio de clonación múltiple (Polylinker). Cuando el dsDNA del M13 se usa como vectores, se puede tratar como un vector plásmido. Sin embargo, el uso de ssDNA m13 tiene ventajas en la secuenciación de ADN y mutagénesis dirigida al sitio.
Dado que el vector de fago m13 tiene múltiples sitios de clonación en lacz Región, los vectores recombinados se pueden identificar fácilmente por la detección de colonias azules/blancas en placas de agar que contiene IPTG y X-Gal. Las placas azules producidas en las placas no contienen los fagos recombinados. Por lo tanto, los fagos con insertos se pueden seleccionar para el propósito de clonación.
Figura 02: Bacteriófago M13
Yac vs m13 vector de fago | |
YAC es un cromosoma genéticamente diseñado que tiene la capacidad de transportar un gran segmento de ADN extraño y replicarse dentro de las células de levadura. | El vector de fago M13 es un vector viral desarrollado por Bacteriófago M13 que se utiliza para insertar ADN extraño en E. coli. |
Objetivo | |
Los YAC fueron diseñados para clonar grandes fragmentos de ADN genómico en levadura. | Los vectores de fagos M13 se utilizan para insertar ADN extraño en E. coli. |
Longitud de inserción | |
YACS puede contener insertos genómicos del tamaño de una megabase (1000 kb - 2000 kb). | El tamaño de los insertos es de aproximadamente 1,500 bps. |
Construcción | |
El ADN YAC es difícil de purificar intacto y requiere una alta concentración para generar un sistema de vectores YAC. | Ocurre a través de la cadena de electrones fotosintéticos cíclicos. |
Estabilidad | |
YAC es inestable. | Los fagos M13 se pueden extraer fácilmente. |
Tamaño | |
Las enzimas son moléculas más grandes. | Los fagos M13 son estables que YAC. |
YAC es un sistema vectorial construido artificialmente que utiliza una región específica del cromosoma de levadura para insertar grandes segmentos de material genético a las células de levadura. El vector de fago M13 es un sistema vectorial derivado del bacteriófago M 13 que usa E. coli Como el organismo anfitrión. Esta es la principal diferencia entre YAC y M13 Phage Vector. Ambos son igualmente útiles en la tecnología de ADN recombinante y la clonación de genes.
Referencia:
1."Vector."Notes genéticos - Vector. norte.pag., norte.d. Web. 16 de mayo de 2017. https: // notas genéticas.wikispaces.com/vector
2."Cromosoma artificial de levadura."Wikipedia. Fundación Wikimedia, 21 de abril. 2017. Web. 16 de mayo de 2017. .
Imagen de cortesía:
1. "M13B" de J3D3 - Trabajo propio (CC BY -SA 3.0) a través de Commons Wikimedia