¿Cuál es la diferencia entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico?

El diferencia clave Entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico es que el ensayo colorimétrico determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que el ensayo fluorométrico determina el mecanismo cinético de una solución.

Un ensayo bioquímico es una técnica que detecta o cuantifica la actividad de una molécula o sustancia biológica analíticamente. Es un in vitro proceso. El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos comunes realizados en laboratorios. Múltiples técnicas como ELISA y transferencia Western también son ensayos bioquímicos complejos para la cuantificación de la actividad metabólica y la medición del comportamiento funcional de biomoléculas como proteínas, enzimas y otras moléculas pequeñas. Estos tipos de ensayos se utilizan para la identificación de interacciones proteína-ADN, ARN de proteínas e proteína-proteína.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es un ensayo colorimétrico?
3. ¿Qué es un ensayo fluorométrico?
4. Similitudes: ensayo colorimétrico y fluorométrico
5. Ensayos colorimétricos vs fluorométricos en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es un ensayo colorimétrico??

Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos de colores en una solución. En otras palabras, el ensayo colorimétrico es una reacción que conduce a un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre reactivos y analitos. Los ensayos colorimétricos se practican en bioquímica para probar enzimas, compuestos específicos, hormonas, anticuerpos y otros analitos. Usan colorimetros o espectrofotómetros. Los colorímetros son instrumentos que caracterizan muestras de colores para proporcionar una medida objetiva de las características de color. Un espectrofotómetro es un dispositivo que mide la intensidad de la luz en función del color o la longitud de onda de la luz.

Figura 01: ensayo colorimétrico

¿Cómo funciona un ensayo colorimétrico??

En un ensayo colorimétrico, se prepara una placa con un anticuerpo particular vinculado a los pozos. Entonces se agrega la muestra. Esto puede permitir que la muestra se una al anticuerpo. Luego se agregan un anticuerpo de detección y un sustrato a los pocillos para reaccionar con la sonda de detección. La solución de parada se agrega al final antes de la lectura. Un pozo vacío llamado en blanco se deja sin la muestra. En el ensayo colorimétrico, cuanto más oscuro es el color, mayor es la concentración de analito. Por lo general, solo se necesita una longitud de onda para tomar la lectura. Pero si hay una medición de referencia, se utilizan dos o más longitudes de onda.

¿Qué es un ensayo fluorométrico??

El ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Un ensayo fluorométrico tiene lugar con una formación de un producto fluorescente de un sustrato no fluorescente o viceversa. Este ensayo también utiliza la transferencia de energía de resonancia de fluorescencia (FRET) donde, la reacción enzimática cambia la posición de dos fluoróforos en el sustrato, cambiando así la intensidad de fluorescencia.

Figura 02: ensayo fluorométrico

Los ensayos fluorométricos son generalmente mucho más sensibles que otros ensayos. Las estimaciones de enzimas de diagnóstico en muestras de tejido, células o líquidos de pacientes aumentan debido a su mayor sensibilidad.

¿Cómo funciona un ensayo fluorométrico??

En un ensayo fluorométrico, se agrega un sustrato a la muestra en la placa, y la respuesta de fluorescencia se toma utilizando el lector de la placa. Aquí, cada célula se mide por separado. Las placas opacas se utilizan en ensayos fluorométricos. Esto reduce la dispersión de la luz. Son necesarias dos longitudes de onda para este tipo de ensayo. Una longitud de onda es detectar la excitación y la otra longitud de onda es para la emisión.

¿Cuáles son las similitudes entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico??

• El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos.
• Ambos ensayos se llevan a cabo para diagnósticos médicos.
• Estos ensayos implican una reacción enzimática.
• Ambos ensayos involucran un sustrato y analitos.

¿Cuál es la diferencia entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico??

Un ensayo colorimétrico es una técnica que determina la concentración de compuestos coloreados en una solución, mientras que el ensayo fluorométrico es una técnica que determina el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas. Entonces, esta es la diferencia clave entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico. Además, los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos; Por lo tanto, los ensayos fluorométricos tienen la capacidad de detectar más analitos. Por lo tanto, esta es otra diferencia importante entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico. Además, los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se llevan a cabo con una longitud de onda.

La siguiente infografía tabula más diferencias entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico.

Resumen -ensayo colorimétrico vs fluorométrico

Un ensayo bioquímico es un proceso analítico utilizado para determinar y cuantificar las reacciones metabólicas celulares. El ensayo colorimétrico y el ensayo fluorométrico son dos tipos de ensayos bioquímicos. El ensayo colorimétrico es una reacción que conduce a un cambio de color debido a una reacción enzimática o química entre reactivos y analitos, mientras que el ensayo fluorométrico es una técnica que se utiliza para determinar el mecanismo cinético de las reacciones enzimáticas.  Ambos ensayos dependen de una reacción enzimática que involucre un sustrato y un analito. Los ensayos fluorométricos son más sensibles que los ensayos colorimétricos. Lo más importante es que los ensayos fluorométricos requieren dos longitudes de onda, mientras que los ensayos colorimétricos se pueden realizar con solo una longitud de onda. Por lo tanto, esto resume la diferencia entre el ensayo colorimétrico y fluorométrico.

Referencia:

1. "Ensayos colorimétricos."Biosciencias experimentales.
2. "Ensayos de enzimas fluorométricas."Enzimas creativas.

Imagen de cortesía:

1. "Ensayo colorimétrico" por Sepehr Ehsani (CC BY-NC-ND 2.0) a través de Flickr
2. "Fluorímetro" de Matthias M. - Trabajo propio (CC por 3.0) a través de Commons Wikimedia