¿Cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC?

El diferencia clave FPLC y HPLC es que FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica grandes biomoléculas como proteínas, nucleótidos y péptidos, mientras que HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa los compuestos de peso molecular pequeños pequeños.

La cromatografía líquida es una técnica utilizada para separar una muestra en sus componentes individuales. Esta separación ocurre debido a la interacción de muestras específicas con fases móviles y estacionarias. Los componentes dentro de una muestra se separan en función de la afinidad de cada componente por la fase móvil en cromatografía líquida. A medida que la fase móvil y la muestra pasan a través de una columna, los componentes de la muestra comienzan a separarse en bandas que pueden detectarse mediante espectroscopía UV-VIS. Por lo tanto, FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es FPLC? 
3. ¿Qué es HPLC?
4. Similitudes - FPLC y HPLC
5. FPLC vs HPLC en forma tabular
6. Resumen - FPLC vs HPLC

¿Qué es FPLC??

FPLC es un tipo de cromatografía líquida que purifica grandes biomoléculas como proteínas, nucleótidos y péptidos. El cromatografía líquida de proteína rápida (FPLC) fue desarrollado y comercializado por primera vez en Suecia por Pharmacia Company en 1982. A menudo se usa para analizar o purificar las mezclas de proteínas. Esto tiene lugar en base al principio de las afinidades de los componentes de muestra para el fluido en movimiento (fase móvil) y un material sólido poroso (fase estacionaria). En FPLC, la fase móvil es un amortiguador, y la fase estacionaria es una resina compuesta de cuentas. Por lo general, consiste en agarosa reticulada empaquetada en una columna de vidrio o plástico cilíndrico.

Figura 01: Aparato de FLPC (cromatografía líquida de proteína rápida)

En la mayor parte de la estrategia FLPC, se utiliza la resina de intercambio iónico. Por lo tanto, la proteína de interés se unirá a la resina por una interacción de carga. La técnica FLPC también usa dos búferes: búfer 1 (el búfer de ejecución) y el búfer 2 (el búfer de elución). Inicialmente, al ejecutar la mezcla de tampón y muestra ejecutado a través de la columna, la proteína de interés en la mezcla se unirá a la resina por interacción de carga. Pero la proteína de interés se disocia y vuelve a la solución en el tampón de elución cuando el tampón de elución se ejecuta a través de la columna al final del proceso. Más tarde, la solución (eluye que contiene proteínas de interés) pasa a través de dos detectores, que miden la concentración de sal y la concentración de proteínas. Como cada proteína se eluye, aparece como un "pico" durante la detección y puede recolectarse para su uso posterior.

¿Qué es HPLC??

HPLC es un tipo de cromatografía líquida que separa los compuestos de peso molecular pequeños. En 1969, el primer HPLC fue fabricado comercialmente por Waters Corporation, EE. UU. En la cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC), una mezcla de muestra (analito) en un disolvente (fase móvil) se bombea a través de una columna con material de empaque cromatográfico (fase estacionaria) a alta presión. La mezcla de muestra es transportada por una corriente de gas portador en movimiento de helio o nitrógeno.

Figura 02: HPLC (cromatografía líquida de alto rendimiento)

Los componentes en la mezcla de muestra que tienen la menor cantidad de interacción con la fase estacionaria o la mayor cantidad de interacción con la fase móvil saldrán de la columna más rápido. Por otro lado, los componentes en la mezcla de muestra que tienen la mayor cantidad de interacción con la fase estacionaria o la menor cantidad de interacción con la fase móvil saldrán de la columna más lenta. Según el principio de interacción anterior, los componentes de la mezcla de muestra se pueden separar. Además, el detector de instrumentos identifica cada componente de la mezcla de muestra que sale de la columna. HPLC se usa para inspeccionar muestras ambientales y biológicas en busca de la presencia o ausencia de compuestos conocidos, como drogas, toxinas o pesticidas. Se utiliza en diferentes industrias como farmacéutica, ambiental, forense y productos químicos.

¿Cuáles son las similitudes entre FPLC y HPLC??

1. FPLC y HPLC son tipos de cromatografía líquida.
2. Ambos se utilizan para separar e identificar muestras biológicas.
3. Tienen una fase móvil líquida y una fase estacionaria sólida.
4. Ambas técnicas usan una columna para pasar a través de la muestra.
5. Estas técnicas utilizan bombas, detectores, válvulas y software para la separación y detección de muestras.

¿Cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC??

FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar grandes biomoléculas como proteínas, nucleótidos y péptidos. HPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para separar los compuestos de peso molecular pequeños. Entonces, esta es la diferencia clave entre FPLC y HPLC. Además, FPLC utiliza monitores de pH y conductividad tan bien como coleccionistas de fracción. En contraste, HPLC no usa monitores de pH y conductividad y recolectores de fracción.

La siguiente infografía enumera más diferencias entre FPLC y HPLC en forma tabular.

Resumen -FPLC vs HPLC

La cromatografía es una técnica analítica de laboratorio utilizada para la separación de componentes de una mezcla. Se divide en varios tipos, como cromatografía en columna, cromatografía de gases, cromatografía líquida, cromatografía de intercambio iónico, etc. FPLC y HPLC son dos tipos de técnicas de cromatografía líquida. FPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para purificar grandes biomoléculas como proteínas, nucleótidos y péptidos. Por otro lado, HPLC es un tipo de cromatografía líquida que se utiliza para separar los compuestos de peso molecular pequeño. Por lo tanto, este es el resumen de cuál es la diferencia entre FPLC y HPLC.

Referencia:

1. "Cromatografía líquida de proteína rápida."News-Medical.red, 25 de enero. 2019.
2. "¿Qué es HPLC/cromatografía líquida de alto rendimiento??"Training de laboratorio, 11 de mayo de 2021.

Imagen de cortesía:

1. "Aparato de cromatografía" de GIAC83 - Trabajo propio (CC By -SA 2.5) Vía Commons Wikimedia
2. "HPLC" de Sam.F. - Trabajo propio (CC By-SA 3.0) a través de Commons Wikimedia