¿Cuál es la diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly?

El diferencia clave Entre Golden Gate y la Asamblea de Gibson es que Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado, mientras que el ensamblaje de Gibson no depende de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado.

En las últimas décadas, los científicos moleculares han desarrollado varios procedimientos estandarizados que permiten el ensamblaje más fácil de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Por lo tanto, los métodos de clonación como la ligadura de enzimas de restricción, la clonación de la puerta de enlace, el ensamblaje de Gibson, el ensamblaje de la puerta de oro y la clonación de topo son ampliamente utilizados por los investigadores en experimentos científicos. Por lo tanto, Golden Gate y Gibson Assembly son dos métodos de clonación molecular que permiten el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.

CONTENIDO

1. Descripción general y diferencia de claves
2. ¿Qué es el conjunto de Golden Gate?
3. ¿Qué es la asamblea de Gibson?
4. Similitudes -Asamblea de Golden Gate y Gibson
5. Golden Gate vs Gibson Assembly en forma tabular
6. Resumen

¿Qué es el conjunto de Golden Gate??

Golden Gate es un método de clonación molecular que facilita el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza. Este método se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado. Se originó en 1996. Esta técnica utiliza enzimas de restricción tipo II y ADN ligasa de ADN T4. Estas enzimas cortan el ADN fuera de los sitios de reconocimiento. Pueden crear voladizos no palindrómicos. Por lo tanto, se pueden ensamblar múltiples fragmentos de ADN utilizando combinaciones de secuencias de voladizo.

Figura 01: Golden Gate

Procedimiento de ensamblaje de Golden Gate

La técnica Golden Gate tiene tres pasos principales en su procedimiento:

• Creación de voladizos en el vector de clonación,
• ensamblaje de múltiples insertos de ADN mediante el uso de secuencias específicas de fragmentos en voladizos, y
• ligadura.

El conjunto de Golden Gate utiliza vectores de clonación circulares (Vector de destino). Además, en este método, el sitio de restricción se elimina del producto ligado para llevar a cabo la digestión y la ligadura simultáneamente. Un protocolo de ciclo térmico típico para la puerta de oro oscila entre 37 ° C y 16 ° C porque 37 ° C es óptimo para las enzimas de restricción y 16 ° C es óptimo para ligasas.

¿Qué es la asamblea de Gibson??

El ensamblaje de Gibson es un método de clonación molecular que permite el ensamblaje de fragmentos de ADN múltiples en una sola pieza. A diferencia del método Golden Gate, este método no se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado. Fue encontrado por Daniel G. Gibson de la J. Instituto Craig Venter. Esta técnica es un tipo de secuencia y método de clonación independiente de ligasa (SLIC).

Figura 02: Asamblea de Gibson

Procedimiento de ensamblaje de Gibson

El ensamblaje de Gibson necesita fragmentos de ADN que contengan 20-40 pares de bases que se superponen con fragmentos de ADN adyacentes. Las superposiciones se agregan a través de PCR. Luego, estos fragmentos de ADN se agregan a la mezcla de Gibson Maser que tiene tres enzimas.  Este procedimiento se lleva a cabo en condiciones isotérmicas (50 ° C durante 1 hora) usando tres enzimas diferentes: exonucleasa, ADN polimerasa y ADN ligasa. La exonucleasa mastica ADN hacia atrás desde el extremo de 5 '. Por lo tanto, no inhibe la actividad de la polimerasa y permite que la reacción proceda en un solo proceso. Las regiones monocatenarias resultantes en fragmentos de ADN adyacentes se pueden recocir debido a secuencias de superposición. La ADN polimerasa llena los vacíos agregando nucleótidos. Finalmente, la ADN ligasa se une covalentemente al ADN de segmentos adyacentes. Normalmente, el ensamblaje de Gibson utiliza vectores de destino linealizados. Además, este método puede combinar simultáneamente hasta 15 fragmentos de ADN basados ​​en la similitud de secuencia.

Similitudes entre Golden Gate y la Asamblea de Gibson

• El conjunto de Golden Gate y Gibson son dos métodos de clonación molecular.
• Ambos métodos pueden ensamblar múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza.
• Estos métodos utilizan vectores de destino.
• Ambos métodos utilizan cicladores térmicos para el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN.
• Se usan en la mutagénesis dirigida al sitio.

Diferencia entre Golden Gate y Asamblea de Gibson

Golden Gate es un método de clonación molecular utilizado en el ensamblaje de múltiples fragmentos de ADN en una sola pieza que depende de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para clonarse, mientras que el ensamblaje de Gibson es un método de clonación molecular utilizado en el ensamblaje de fragmentos de ADN múltiples en una sola pieza sin depender de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado. Esta es la diferencia clave entre Golden Gate y Gibson Assembly. Además, el método Golden Gate utiliza un vector de destino circular, mientras que el método de ensamblaje de Gibson utiliza un vector de destinos linealizados.

La siguiente infografía tabula la diferencia entre Golden Gate y Gibson Assembly.

Resumen -Asamblea de Golden Gate vs Gibson

La clonación molecular es un método utilizado para ensamblar moléculas de ADN recombinantes y dirigir su replicación dentro de los organismos del huésped. El ensamblaje Golden Gate y Gibson son dos métodos de clonación molecular que permiten el ensamblaje de fragmentos de ADN múltiples en una sola pieza. El método Golden Gate se basa en la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado, mientras que el ensamblaje de Gibson no depende de la presencia de sitios de restricción dentro de una secuencia particular para ser clonado. Por lo tanto, esta es la diferencia clave entre Golden Gate y Gibson Assembly.

Referencia:

1. "Asamblea de Golden Gate."New England Biolabs: Reactivos para la industria de las ciencias de la vida.

Imagen de cortesía:

1. "Golden Gate Assembly" de Lee Yun Jie - Trabajo propio (CC By -Sa 4.0) a través de Commons Wikimedia
2. "Descripción general del ensamblaje de Gibson" de Tobias Vornholt - Trabajo propio (CC BY -SA 4.0) a través de Commons Wikimedia